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在流式细胞术与多参数细胞分析领域,如何在不增加新激光器的前提下拓展检测通道数量,提升单样本可同时检测的靶标参数上限,一直是流式技术优化的重要方向。CY5-R-藻红蛋白,即花青5标记R-藻红蛋白串联染料,依托荧光共振能量转移原理,实现了单激发、长发射的远红光通道拓展,成为了多色流式配色方案中的经典核心试剂。该试剂以天然提取的高亮度R-藻红蛋白作为能量供体,通过共价键将CY5荧光分子偶联在藻红蛋白表面,488nm激光激发下,藻红蛋白吸收的能量可高效转移至CY5受体,最终发射670nm左右的远红光信号。
相较于单独的CY5有机荧光染料,CY5-R-藻红蛋白的整体荧光亮度提升了数十倍,远红光的发射波长有效避开了细胞自发荧光集中的短波长区域,背景噪声大幅降低,特别适合检测细胞表面低丰度表达的靶标分子。在常规配备488nm单激光器的流式平台上,该串联染料可与FITC、PE等常规通道完美兼容,无需额外加装633nm激光器,即可新增一个远红光检测通道,将单样本可同时检测的荧光参数数量从3色拓展至4色,大幅提升了老旧流式设备的多参数分析能力。
在微球多重检测平台中,CY5-R-藻红蛋白还可作为编码荧光使用。通过调整藻红蛋白与CY5的偶联比例,获得不同荧光强度梯度的微球编码信号,结合其他通道的报告荧光,可在单管反应中同时完成数十种不同靶标的定量检测,广泛应用于高通量蛋白定量、核酸多重分析等场景。该串联染料的光稳定性远高于普通有机远红光染料,在长时间的高通量样本采集过程中,信号强度几乎不会出现明显衰减,保证了大样本量检测的数据稳定性。

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