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异硫氰酸荧光素标记葡聚糖,英文名称Fluorescein‑isothiocyanate‑Dextran。FITC‑DEX是以细菌来源葡聚糖多糖骨架为母体,通过硫代氨基甲酰共价键接枝异硫氰酸荧光素制备得到的荧光高分子多糖,黄色至橙黄色粉末,CAS号60842‑46‑8,具备495nm激发、525nm发射绿色荧光特征,拥有丰富的分子量梯度规格,从几千道尔顿到几十万道尔顿均可制备,不同分子量对应不同流体力学半径,染料取代度可控,游离未偶联FITC杂质含量低,可溶于水、盐缓冲液、DMSO等极性溶剂,不溶于氯仿、低级脂肪醇等非极性溶剂,粉体易吸潮,需要避光干燥保存。
葡聚糖本身是凝胶过滤色谱经典标准参照物,FITC‑DEX在保留葡聚糖分子尺寸分级特性基础上增加荧光检测信号,相比传统示差折光检测器,荧光检测模式灵敏度更高,检出下限更低,适合低浓度样本检测。将一系列不同分子量FITC‑DEX混合样品上样凝胶过滤色谱柱,采集色谱流出组分荧光信号,绘制出分子质量‑洗脱体积标准曲线,完成凝胶过滤层析柱的标定工作,确定色谱介质分离范围,标定凝胶介质排阻极限,为后续未知高分子多糖、水溶性聚合物分子量测定建立校准基准。该标定方式只需要少量样品,不用复杂的示差设备,借助普通荧光检测器就可以完成,适合多糖类高分子样品的色谱体系建立。
除色谱标定之外,FITC‑DEX也常作为流体相大分子示踪物,用于三维凝胶体系内部溶质迁移行为研究。把不同分子量FITC‑DEX引入水凝胶基质,借助荧光共聚焦显微镜,观察荧光多糖在凝胶三维网络内部扩散分布,分析凝胶交联网络对不同流体力学尺寸大分子的阻滞效应,研究凝胶孔径、交联密度对大分子扩散速率的影响规律。实验操作需要全程避光,避免荧光基团光漂白;水溶液母液不宜长期存放,现配现用;体系pH维持中性区间,高pH环境会加速荧光基团降解,降低检测信号。该分子不会主动穿透完整生物膜结构,作为流体相示踪标记物,能够客观反映大分子溶质扩散迁移行为,不干扰体系原有理化环境。FITC‑DEX集合多糖分子量分级特性与荧光高灵敏检测优势,在凝胶色谱标定、高分子扩散行为研究方向是十分实用的参考标记试剂。

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