DBCO‑PEG‑NHS，DBCO‑PEG‑NHS，完整命名二苯并环辛炔‑聚乙二醇‑N‑羟基琥珀酰亚胺酯，属于异双功能交联PEG，一端为NHS活化酯基团，另一端为DBCO二苯并环辛炔，中间间隔PEG亲水链，核心用途是向含有伯氨基的底物分子上定点引入DBCO无铜点击化学手柄，是蛋白、多肽、氨基修饰固相材料功能化的核心合成工具。该试剂PEG链长拥有PEG1‑PEG10多种规格，多为白色或者浅米色固体，可溶于DMSO、DMF，在纯水环境*易水解，现配现用，储存条件‑20℃干燥密封隔绝水汽，严禁长时间接触水溶液。

两端官能团反应模式完全区分：NHS酯基团可以在pH7.2‑8.5弱碱性缓冲体系中，特异性和伯氨基发生反应，生成稳定酰胺共价键，主要靶向蛋白赖氨酸残基侧链氨基、多肽N端氨基、氨基修饰固相载体；DBCO基团后续可以和叠氮官能团底物进行SPAAC无铜点击环加成反应，构建稳定三氮唑环连接结构。整套实验分为两步，第一步NHS酯和氨基底物反应，把DBCO手柄接到底物之上；纯化除去未反应试剂之后，第二步再和叠氮标记的功能分子完成点击偶联，两步反应可以分开进行，便于中间产物纯化质控，规避官能团之间互相干扰，实现模块化分子组装。

该试剂*大应用价值在于给蛋白、多肽预先植入点击化学活性位点。很多蛋白分子本身不具备叠氮、DBCO这类生物正交基团，直接使用点击试剂无法偶联；利用DBCO‑PEG‑NHS，通过蛋白自带的赖氨酸氨基，将DBCO基团共价引入蛋白结构，得到DBCO修饰蛋白，后续就可以和任意叠氮标记的荧光染料、寡核苷酸、多肽进行无铜点击标记，完成蛋白的模块化修饰。PEG间隔链起到柔性间隔作用，拉开DBCO基团和蛋白骨架之间距离，降低空间位阻，大幅提升后续点击反应的转化效率，同时改善改性蛋白的水溶性，减少蛋白分子聚集沉淀风险。

除生物大分子修饰之外，DBCO‑PEG‑NHS广泛用于氨基修饰固相材料表面改性。氨基硅烷处理的玻片、氨基微球、氨基水凝胶，都可以通过NHS酯的反应，将DBCO点击基团接枝到固相表面，构建可用于无铜点击反应的活性界面，后续可接枝叠氮改性的各类配体，实现固相界面分子固定。实验操作上需要重点关注NHS酯*易水解的特性，水溶液缓冲液必须现配现用，缓冲体系不能含有游离氨基成分，例如Tris、甘氨酸等，游离氨基会快速消耗NHS酯，直接导致修饰失败。第一步氨基偶联完成之后，需要充分纯化除去残余试剂，再开展第二步点击化学反应，避免杂质干扰偶联效果。

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