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DBCO-PEG-Biotin,中文名称为二苯并环辛炔-聚乙二醇-生物素,别名Dibenzocyclooctyne-PEG-Biotin、Biotin-PEG-DBCO、DBCO-PEG-Biotin conjugate,是将高亲和性生物素基团与无铜点击反应基团DBCO通过PEG链段连接的功能化亲和探针。该探针将点击化学的高反应特异性与生物素-链霉亲和素的超高亲和性相结合,为复杂体系中叠氮修饰目标物的捕获与富集提供了一种高效便捷的新方案。
传统的生物素标记探针很多依赖氨基或巯基的偶联反应实现标记,在复杂体系中很容易发生非特异性偶联,导致后续亲和富集过程中大量杂质被共富集,最终得到的目标产物纯度偏低。而DBCO-PEG-Biotin通过无铜点击反应与叠氮修饰的目标物进行偶联,反应的特异性*强,即使在成分极其复杂的混合体系中,也只会和预先带有叠氮基团的目标分子发生共价连接,几乎不会产生非特异性偶联产物,从源头减少了后续富集过程中的杂质引入。
中间的PEG链段在生物素基团和DBCO反应端之间形成了足够长的柔性间隔臂,一方面有效降低了DBCO反应端的空间位阻,让探针能够顺利和空间位阻较大的叠氮位点发生点击反应,提升标记效率;另一方面也让生物素基团远离被标记的目标分子,保证生物素可以自由地与链霉亲和素树脂的结合口袋相互作用,大幅提升后续亲和富集过程的结合效率,避免了间隔臂过短导致的空间位阻阻碍亲和结合的问题。
该探针在复杂体系的目标物富集纯化中优势显著,科研人员可以先将DBCO-PEG-Biotin加入含有叠氮修饰目标物的复杂混合体系中,在温和条件下完成特异性点击标记,之后再加入链霉亲和素修饰的微球,利用生物素与链霉亲和素的超高亲和力,将标记了生物素的目标分子从复杂体系中高效分离出来。整个富集过程的特异性强、回收率高,能够从成分复杂的粗样品中高效分离出目标产物,大幅降低后续的纯化难度,得到高纯度的目标样品。

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