Agarose‑LCA，琼脂糖偶联小扁豆凝集素，是将小扁豆来源的LCA（Lens culinaris agglutinin，小扁豆凝集素）共价键合在琼脂糖微球基质上制备而成的亲和层析固相介质，属于凝集素亲和分离填料，在糖生物学、糖蛋白质组学领域占据重要位置。LCA凝集素蛋白本身是金属依赖型糖识别蛋白，分子发挥识别活性需要钙离子、锰离子二价金属离子参与，能够特异性识别α‑D‑甘露糖、α‑D‑葡萄糖残基以及特定空间构型的糖链结构，对高甘露糖型N‑糖链具备高度偏好性，对复杂杂合型糖链结合能力偏弱，该识别特性是该介质实现糖缀合物分离富集的核心基础。基质采用多孔琼脂糖微球，具备大孔径、高亲水性、低非特异性吸附的特点，蛋白分子可以自由扩散进入微球内部孔道，大幅提升填料结合容量。凝集素蛋白通过稳定共价键固定于琼脂糖骨架，减少使用过程中蛋白脱落，保障层析实验重复性，填料多为混悬缓冲液保存的微球悬液，可直接装填层析柱，也可用于批次孵育式固相富集操作。

该填料区别于普通离子交换、疏水层析填料，分离逻辑不依靠蛋白电荷、疏水性差异，完全依托糖链‑凝集素特异性亲和相互作用，能够从复杂混合样本中，依据糖基化修饰特征实现组分分离，专门针对糖蛋白、糖脂、含糖链生物大分子开展富集。样本上样之后，带有LCA识别糖基的分子特异性吸附在填料上，无对应糖链修饰的杂蛋白直接流穿；经过洗涤去除非特异性结合杂质，再使用游离甘露糖或者葡萄糖单糖溶液进行竞争性洗脱，特异性解离目标糖缀合物，温和洗脱条件可以*大程度保护糖蛋白天然构象，避免蛋白变性失活，适合获取保有生物活性的糖蛋白样品。

Agarose‑LCA最主要用途是糖蛋白质组学样本前处理。细胞裂解液、组织提取液、血清等复杂样本中糖蛋白丰度低，大量非糖基化蛋白会干扰后续质谱分析，借助该填料可以选择性富集带有高甘露糖糖链的糖蛋白组分，去除大量非糖基化杂蛋白，降低样本复杂度，提升后续糖组、蛋白组质谱检测灵敏度。除完整糖蛋白富集之外，也可用于糖肽富集，蛋白酶酶解得到肽段混合物，利用填料捕获带有目标糖链的糖肽，洗脱之后开展糖基化位点解析，为糖蛋白翻译后修饰研究提供样本支撑。

该介质同样用于膜蛋白、膜囊泡组分分离。细胞膜表面很多膜蛋白带有高甘露糖N‑糖链，细胞膜裂解之后得到膜组分，利用Agarose‑LCA固相孵育，可以富集带有对应糖修饰的膜蛋白以及膜囊泡组分，实现膜亚组分分离。该填料也可用于糖蛋白粗品的纯化分级，对混合糖蛋白样品进行层析，依据糖链结构差异实现不同糖型组分的分离，区分高甘露糖糖型与其他糖型蛋白。使用过程中，上样、洗涤缓冲液必须添加钙离子、锰离子，缺失二价阳离子会直接造成凝集素糖识别活性丧失；洗脱阶段采用游离单糖竞争洗脱，不建议使用强变性试剂，防止凝集素蛋白变性失活；填料可以重复循环使用，合适储存条件下维持较长使用寿命，避免反复冻融破坏琼脂糖微球骨架结构。

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