AF680‑Protein A/B，Alexa Fluor680标记蛋白A/B，是将Alexa Fluor 680近红外荧光染料与重组蛋白A/B通过共价键偶联制备的荧光亲和探针，蛋白A/B为重组融合表达产物，保留抗体Fc段结合结构域，能够特异性识别多种来源IgG抗体Fc区域；染料为Alexa Fluor 680近红外荧光基团，激发波长684nm，发射波长702nm，处于近红外光学窗口，具备光稳定性强、荧光量子产率高、背景荧光低的特点，染料与蛋白之间共价连接稳定，不容易发生染料解离泄露现象，是免疫检测体系中重要的荧光报告探针。产品一般为水溶液形式，蛋白浓度、染料蛋白摩尔偶联比F/P为关键参数，常规F/P维持在3‑5区间，偶联比过高容易造成蛋白聚集，过低则荧光信号不足；试剂需要‑20℃避光保存，避免反复冻融，光照会造成荧光基团光漂白，全程避光操作，禁止高温处理，防止蛋白变性失活。该试剂不依赖一抗物种来源二抗，依靠蛋白A/B与抗体Fc的亲和作用，识别已经结合样本的一抗IgG，替代传统荧光二抗，简化多物种样本的免疫检测实验流程。

该探针最突出优势来自Alexa Fluor 680近红外光谱特性。普通可见光荧光染料容易受到生物样本自发荧光干扰，而近红外波段生物基质自发荧光信号微弱，能够显著降低背景噪声，提升检测信噪比，非常适合蛋白印迹、微孔板高通量检测、多色流式分析等多通道并行实验，光谱和常见488、555通道荧光染料区分度高，光谱串扰小，适合构建多色标记方案，实现同一个样本多靶点同步检测，减少样本消耗量，提升实验通量。

在体外免疫分析技术层面，AF680‑Protein A/B广泛用于Western blot荧光成像。电泳转膜完成之后，一抗孵育结束，使用该荧光探针代替二抗孵育，探针结合膜上一抗，直接开展近红外荧光扫描成像，获得蛋白条带荧光信号。对比化学发光检测，近红外荧光可以实现膜上信号直接定量，可多次重复扫描，无底物衰减问题，便于开展蛋白相对定量分析。同时适配微孔板免疫检测，固相载体固定抗原，一抗结合之后加入AF680‑Protein A/B，读取近红外荧光信号，实现高通量样本定量检测，适合大批量样本筛选工作。在细胞与组织切片免疫荧光染色中，该探针用于细胞涂片、石蜡切片的荧光标记，完成靶标蛋白定位，近红外荧光穿透能力更强，适合较厚组织切片成像，减少切片自发荧光干扰，获取更加干净的荧光成像结果。

流式细胞多色分析是该试剂另一重要应用方向。多色流式实验中，将AF680‑Protein A/B作为报告探针，识别细胞表面结合的一抗，用于细胞表面靶标分子检测。因为蛋白A/B可以识别多个物种IgG，一套探针就可以适配不同宿主来源一抗，减少采购多种荧光二抗的成本。实验中需要控制探针工作浓度，浓度过高会带来非特异性背景；孵育条件温和，避免剧烈震荡造成细胞损伤。该探针不适合用于活细胞长时间孵育，长时间孵育会提升非特异性吸附，孵育完成之后充分洗涤去除未结合探针，降低背景。染料蛋白偶联比是实验成败关键，F/P过高会造成蛋白聚集，产生非特异性吸附，采购与使用时需要关注该指标，选择合适偶联比例的产品开展实验。

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