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AF546-Protein A/B,中文全称为Alexa Fluor 546标记蛋白A/B,其完整英文名称还可写为AF546-Staphylococcal Protein A/B、Alexa Fluor 546 Conjugated Protein A and B。该功能分子是将Alexa Fluor 546荧光染料通过共价键定点偶联到重组蛋白A与蛋白B分子上制备得到的荧光标记复合物,完整保留了蛋白A/B的Fc段特异性结合位点,同时引入了光谱性能优异的AF546荧光基团,是兼具特异性识别能力与高灵敏度荧光示踪功能的双功能探针。
Alexa Fluor 546荧光染料拥有极为优异的光谱性能,其激发峰与546nm的绿光激光器完全匹配,发射峰位于573nm,荧光量子产率高、光稳定性强,在宽范围的pH环境中荧光强度几乎不会发生变化,远优于传统罗丹明类荧光染料。同时该染料经过特殊的磺酸化修饰,亲水性*强,标记到蛋白分子上之后不会引发蛋白分子之间的疏水聚集,可在水相缓冲液中长时间保持完全溶解的均一状态。
在免疫检测的信号示踪研究中,AF546-Protein A/B展现出*高的应用便利性。传统的间接荧光标记方法需要先对一抗进行荧光标记,操作流程复杂且容易破坏抗体活性,而使用该荧光标记蛋白A/B时,仅需在一抗孵育完成后,加入该探针进行简单孵育,探针就会通过蛋白A/B的Fc结合位点特异性识别并结合到一抗的Fc区域,无需对一抗进行任何预先修饰,就能快速完成荧光信号的标记,大幅简化免疫荧光检测的操作流程,同时还能有效避免荧光标记对一抗抗原结合位点的活性破坏。
在蛋白相互作用的可视化研究场景中,该探针可作为通用型荧光报告分子使用。将AF546-Protein A/B与带有Fc标签的重组目标蛋白混合孵育,二者可通过蛋白A/B与Fc段的特异性相互作用快速结合,一步完成对目标蛋白的荧光标记。这种非共价标记方式条件极为温和,不会对目标蛋白的空间构象造成破坏,标记完成后的荧光蛋白复合物可直接用于单分子示踪、蛋白定位观测等研究,实时追踪目标蛋白在溶液体系中的运动与分布行为。

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