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该偶联物是将荧光素报告基团与半乳糖分子通过硫脲键共价连接得到的糖基功能化荧光探针,外观为亮黄色固体粉末,在水相缓冲液中溶解性*佳,几乎不溶于非极性有机溶剂。其分子结构完整保留了半乳糖的吡喃环空间构象,同时引入了在可见光区具备高摩尔消光系数的荧光素基团,实现了糖链识别特性与光学示踪能力的完美结合。
从分子相互作用特性来看,半乳糖基团可被特定的糖结合蛋白特异性识别,这种识别过程具备严格的糖型选择性,不会与葡萄糖、甘露糖等其他常见单糖的结合蛋白发生交叉反应。共价连接的荧光素基团*大激发波长为494纳米,*大发射波长为521纳米,荧光量子产率高,信号强度远高于传统同位素标记的检测灵敏度,可直接通过常规荧光分光光度计、酶标仪或共聚焦显微镜完成定量与定位检测。连接荧光素与半乳糖的硫脲键化学稳定性*强,在pH 3-10的宽范围内都不会发生水解断裂,可适配绝大多数生化反应体系。 该探针在糖生物学研究中可用于建立简便的糖结合蛋白体外筛选体系,无需复杂的同位素标记操作,仅需通过荧光信号的强度变化即可快速定量分析蛋白与糖链之间的亲和作用强弱。
相较于游离的荧光素分子,偶联半乳糖后该探针的非特异性吸附大幅降低,在细胞孵育实验中背景荧光*低,可清晰观测到半乳糖介导的特异性结合过程。实验操作时直接用无菌PBS缓冲液即可配制成不同浓度的工作液,4℃避光条件下液体状态可稳定保存1个月,-20℃密封避光储存的固体粉末有效期可达18个月。该探针还可用于制备荧光标记的糖亲和层析介质,用于从复杂蛋白混合物中一步分离纯化目标半乳糖结合蛋白,大幅简化纯化流程。

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