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脂多糖(LPS)是具有两亲结构的生物大分子,分子分为亲水多糖链段与疏水类脂A区域,多糖链上分布大量羟基、羧基等活性位点,可用于荧光发色团的共价修饰。Cyanine5.5-Lipopolysaccharide是将Cy5.5近红外花菁荧光基团通过化学连接臂接枝在脂多糖骨架上得到的大分子荧光偶联体系。Cy5.5属于五甲川花菁衍生物,共轭链长度适中,吸收与发射光谱落在近红外一区波段,摩尔消光系数高,荧光信号稳定,适合作为大分子标记的光学报告单元。
脂多糖本身具备两亲属性,在水相环境中会自发形成聚集体,疏水类脂A区域相互靠拢,亲水多糖链向外伸展,形成囊泡或者胶束状组装结构。将Cy5.5接枝到脂多糖骨架之后,花菁发色团会分布在大分子组装体表面或者多糖链区域。当标记密度较高时,相邻Cy5.5分子距离缩短,容易发生分子间激子耦合,出现荧光自淬灭现象;标记密度较低时,发色团相互远离,能够维持稳定荧光输出。因此标记度调控是制备该偶联体系的关键,直接影响组装体光学性能。
该大分子偶联体系表征手段丰富。凝胶渗透色谱可以测定标记前后脂多糖流体力学半径,观察接枝荧光基团带来的分子尺寸变化;荧光光谱用于监测不同标记密度样品的荧光淬灭效应;动态光散射可观测偶联分子在水溶液中的聚集体粒径与胶体稳定性;原子力显微镜能够直观获取组装聚集体表面形貌。红外光谱可验证偶联化学键生成,质谱用于分析小分子修饰片段,多糖大分子完整分子量可借助基质辅助质谱进行表征。
Cyanine5.5-Lipopolysaccharide可作为荧光标记的两亲多糖大分子模型,用于研究脂多糖分子在溶液中的自组装动力学。借助近红外荧光信号追踪聚集体在不同离子强度、pH条件下的组装解离过程,探究金属离子对脂多糖组装结构的调控作用。同时可以对比不同标记位点、不同标记密度样品,分析花菁发色团引入对脂多糖大分子聚集临界浓度、聚集体形貌的影响规律,为两亲多糖类生物大分子的荧光标记与组装机理研究提供可视化研究体系。

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