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Cy3-COOH(羧酸修饰的Cy3荧光染料)是一种带有羧酸基团的Cy3荧光染料,通常用于与氨基反应的化学修饰或共价结合。在生物标记、荧光成像及分子追踪中,Cy3-COOH能够方便地与各种生物分子(如蛋白质、肽链、核酸等)进行耦合,是一种活性良好的荧光标记物。
羧酸基团(-COOH)的功能:
反应性:Cy3上的羧酸基团可用于与氨基反应形成酰胺键,这通常通过活化剂(如EDC,1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺)来促进反应。
共价结合:羧酸基团的存在允许它与各种氨基修饰的分子(如氨基酸、蛋白质、抗体、寡核苷酸等)共价结合,用于标记或修饰生物分子。
常见的修饰步骤:
羧酸活化:
- 使用EDC或其他羧酸活化剂将Cy3-COOH活化,生成中间产物O-酰脲化物。
- 可进一步使用**NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)**将其转化为更稳定的NHS酯,以便与氨基分子反应。
与氨基反应:
- 将活化后的Cy3-COOH与含有自由氨基的分子(如蛋白质、肽、寡核苷酸等)反应,形成共价酰胺键。
- 该步骤通常在pH 7-9的缓冲溶液中进行,以确保反应效率。
纯化:
- 反应完成后,可通过透析、凝胶过滤等方式去除未反应的Cy3染料或副产物,获得纯化的Cy3标记分子。
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