Sulfo-CY3-DBCO 描述

Sulfo CY3-DBCO（磺酸化CY3-DBCO）

Sulfo CY3-DBCO 是一种水溶性荧光染料，用于铜离子自由的点击化学反应。它结合了Sulfo-CY3（磺酸化Cyanine 3，激发波长550 nm，发射波长570 nm）与DBCO（双环辛炔）功能团，后者可与叠氮类物质进行快速、特异性的 SPAAC 反应（应变促进的叠氮-炔点击反应）。由于其磺酸基团增强了水溶性，Sulfo CY3-DBCO 非常适用于在水性体系中标记蛋白、抗体、核酸和多糖类叠氮修饰物。它在细胞标记、活体成像、生物共轭等研究中具有广泛应用，尤其适合于无需催化剂的生物体系中。

一、基本信息

名称：Sulfo-CY3-DBCO

中文名称：磺酸化CY3-DBCO荧光探针

CAS:1782950-79-1

二、物化性质

颜色和外观：红色至深橙色固体粉末

纯度：≥95%（HPLC）

溶解度：*易溶于水、PBS缓冲液、DMSO和DMF

*性：高亲水性，因引入磺酸基团和PEG链，具有良好水溶性

pH稳定性：pH 5.0–9.0 条件下稳定

官能团：含DBCO基团（Dibenzocyclooctyne，具有应变炔结构），可与叠氮（azide）类分子进行铜离子无催化的点击反应（SPAAC）

三、光学性能

吸收波长（λabs）：约 550 nm

发射波长（λem）：约 570 nm

荧光性质：高量子产率，信噪比高，适合细胞和组织成像

激发光源推荐：兼容532 nm 或561 nm激光器

四、储存条件

储存温度：-20°C避光干燥储存

有效期：至少12个月（密封避光保存）

避免条件：避免反复冻融，避免高温和强光照射

复溶后使用期限：水溶液中建议4°C避光储存，1周内使用；长期使用可分装冷冻保存

五、制备简介

Sulfo-CY3-DBCO 通常通过以下方式合成：

1. 以CY3（Cyanine 3）为基础染料进行磺酸化修饰（Sulfo）以增强水溶性；

2. 将CY3通过共价键连接至一个活性PEG链段上（例如NH-PEG-COOH），该PEG链段增强其空间位阻和生物相容性；

3. *后引入DBCO基团，通过活性酯（NHS）或羧酸酰胺反应链接至PEG端；

4. 成品通过HPLC和质谱等方法纯化和表征。

六、应用领域

1. 生物正交标记（Bioorthogonal Labeling）

Sulfo-CY3-DBCO 是生物正交反应的典型探针，常用于点击化学标记叠氮修饰的生物大分子，如：

叠氮标记的DNA、RNA、蛋白质或糖类；

荧光示踪细胞内过程；

靶向纳米粒子的标记，如叠氮修饰的脂质体、聚合物载体等。

2. 活体成像（Live-cell Imaging）

因其不依赖金属离子（Cu-free），可以用于活细胞或活体动物体系中进行无毒荧光标记，适合：

细胞表面分子追踪；

纳米药物载体在活体组织中的分布监测；

脑血屏障穿透实验中标记荧光探针。

3. 免疫荧光染色（IF）

可用于原位免疫染色，尤其是用于原位杂交（FISH）或原位RNA成像（RNA-FISH）中的叠氮修饰探针染色。

4. 微阵列与微球编码

用于高通量微阵列（microarray）或编码微球中的荧光编码。

七、相关文献（中文翻译与引用）

1. Chen et al., *Bioconjugate Chemistry*, 2020

   > 使用Sulfo-CY3-DBCO对叠氮化肽进行无铜点击标记，实现了细胞特异性靶向与追踪。实验表明该染料在细胞培养液中稳定性高，荧光信号持续时间长。

2. Li et al., *Journal of Nanobiotechnology*, 2021

   > 通过将Sulfo-CY3-DBCO连接至叠氮修饰的纳米脂质体，实现纳米递送系统的可视化追踪。研究证实其对细胞毒性*低，适用于动物实验。

3. Zhou et al., *Frontiers in Chemistry*, 2022

   > 在构建pH响应型智能聚合物探针时，将Sulfo-CY3-DBCO作为荧光标签，通过SPAAC反应成功连接至叠氮修饰的聚合物主链，实现可控释放下的荧光成像。

八、注意事项

使用前请确保反应体系无游离还原剂（如DTT、TCEP）或铜离子；

本品应在避光条件下使用，以避免荧光衰减；

建议使用HPLC纯度的叠氮底物以提高标记效率；

荧光信号可通过常规流式细胞仪或共聚焦显微镜进行检测。