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FITC-Dextran,绿色荧光标记葡聚糖,FITC标记葡聚糖用于血管通透性评价的示踪研究
一、基本信息
中文名:FITC-葡聚糖 / 绿色荧光标记葡聚糖
英文名:FITC-Dextran
别称:荧光素标记葡聚糖、荧光素异硫氰酸酯葡聚糖、Fluorescein-Dextran
化学组成:FITC(荧光素异硫氰酸酯)标记的葡聚糖(Dextran,一种可溶性多糖)
FITC-Dextran 是将绿色荧光染料 FITC(Fluorescein Isothiocyanate)通过化学方式与葡聚糖分子上的羟基或氨基进行共价连接制备而成的荧光探针,具有良好的水溶性、生物相容性和强烈绿色荧光发射信号,广泛用于细胞生物学、分子追踪、血管渗透性评估等研究领域。
二、光学性质
激发波长(λ_ex):约 490 nm
发射波长(λ_em):约 520–530 nm
发射颜色:明亮的绿色荧光
量子产率:高,约在0.9左右
荧光稳定性:良好,但对光照较敏感,需避光保存
FITC 属于常用的绿色荧光染料,与多种激光共聚焦显微镜、流式细胞仪和荧光成像设备兼容。
三、物化属性
组成:葡聚糖骨架 + FITC染料基团
分子量:可根据实验需求选择,常见有 4 kDa、10 kDa、20 kDa、40 kDa、70 kDa、150 kDa、500 kDa 等不同规格
溶解性:*易溶于水、PBS、细胞培养液
外观:淡黄绿色至黄绿色粉末
储存条件:干燥、避光、2–8°C保存,溶液需冷冻保存(-20°C)避免反复冻融
不同分子量决定其扩散性和细胞穿透性,实验设计中可根据用途选择合适规格。
四、合成方法简述
活化染料:FITC具有异硫氰酸基团(–N=C=S),可与葡聚糖或氨基修饰葡聚糖的–OH 或 –NH₂基团反应。
反应条件:一般在碳酸盐缓冲液中(pH 9.0)进行,FITC溶解于DMSO中缓慢加入葡聚糖溶液中。
共价偶联:异硫氰酸基团与羟基(或氨基)形成稳定的硫代脲或氨基脲键。
纯化:反应后需透析(使用3.5–10 kDa MWCO膜)以去除未反应的游离FITC。
冻干保存:透析液冷冻干燥后得到纯化的FITC-Dextran产品。
商业品通常为高纯度制备,标记度可控,用户可根据标记密度选择不同规格产品。
五、主要应用方向
细胞摄取与胞吞研究
FITC-Dextran可用于观察细胞对不同分子量大分子的摄取能力,尤其适用于吞噬细胞(如巨噬细胞、树突状细胞)的吞噬行为分析。
血管渗透性测定
注射不同分子量的FITC-Dextran后,通过荧光成像观察其在组织中扩散情况,是经典的评估血脑屏障、肿瘤血管渗透性等实验手段。
组织间隙扩散与分子通透性研究
利用FITC-Dextran作为示踪分子研究在组织、器官或体液环境中的渗透和分布行为。
微流控系统示踪
在芯片、胶体系统中,FITC-Dextran可用作液流可视化追踪分子,用于观察流场分布。
细胞共聚焦显微成像
配合共聚焦显微镜进行3D结构或胞内追踪,如细胞内囊泡路径、溶酶体/内体标记等。
肠道通透性与屏障功能研究
在小鼠或大鼠灌胃FITC-Dextran后检测血浆荧光强度,评估肠道上皮通透性,是肠漏实验的常规指标。
六、优势特点
绿色荧光信号清晰,与DAPI等蓝色染料、TRITC等红色染料可多色搭配;
分子量可控,便于研究不同尺寸大分子的穿透和分布;
水溶性极好,不需有机溶剂辅助;
无毒、惰性强,生物兼容性良好,适用于细胞和动物实验;
可冻干保存,便于长期储存和使用。
七、代表性文献与研究示例
Wong KH et al. Use of FITC-Dextran as a Permeability Tracer in Gut Epithelium Studies. J Pharm Sci. 2012;101(11):4171–4180.
→ 应用于评估肠道屏障完整性。
Kang JH et al. Visualization of Blood-Brain Barrier Disruption Using FITC-Dextran in Mouse Models. Neurosci Lett. 2015;605:81–86.
→ 小鼠脑血管通透性研究。
Lopez CA et al. Size-dependent endocytosis of FITC-Dextran by macrophages for uptake mechanism analysis. Biomacromolecules. 2020;21(3):1452–1463.
→ 巨噬细胞吞噬路径研究。
Lehner T et al. FITC-Dextran diffusion in hydrogels and tissues for imaging-based molecular transport analysis. Acta Biomater. 2019;96:327–336.
→ 组织工程材料渗透性能评估。
八、使用建议与注意事项
配制溶液建议使用无菌PBS或HEPES缓冲液;
使用过程中应避光操作,防止FITC荧光衰减;
多色染料实验中注意荧光通道分离,避免交叉干扰;
配制后溶液不建议长期室温保存,可小分量冻存;
不同分子量对实验结果影响较大,建议预实验优化条件。
总结
FITC-Dextran是一种绿色荧光标记的葡聚糖复合物,结合了葡聚糖良好的生物相容性与FITC优良的荧光性质,在细胞摄取、组织通透性、微流控成像等生物医学研究中具有广泛应用价值。其多种分子量规格和高灵敏度信号为分子示踪、屏障功能评估及药物释放机制探索提供了可靠工具,是生命科学领域常用的荧光探针材料之一。
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