CY5.5标记肌钙蛋白，Cy5.5-Calmodulin, CaM的反应机理
肌钙蛋白（Calmodulin, CaM）是一种存在于真核细胞中的钙离子结合蛋白，参与调控多种细胞信号通路。其含有丰富的赖氨酸残基及N末端氨基，是荧光染料标记的理想靶点。CY5.5染料通过其活性酯形式（通常为NHS酯）与肌钙蛋白的氨基官能团共价结合，形成稳定的标记产物。该反应机理可分为以下步骤：
1. 反应活性基团的选择
CY5.5常以NHS（N-羟基琥珀酰亚胺）活化酯的形式存在，具备高活性的亲电碳酰中心，能与蛋白质上的一级氨基发生亲核取代反应。
肌钙蛋白的赖氨酸残基ε-氨基和N端氨基是主要的亲核部位，能攻击活性酯中的碳酰碳，形成稳定的酰胺键。
2. 亲核加成-消除机理
首先，蛋白质氨基的孤对电子对NHS酯的碳酰碳进行亲核攻击，形成四面体中间体。
随后，中间体发生消除反应，NHS离去，生成共价酰胺键，完成染料与蛋白质的偶联。
该反应过程中释放的NHS分子可溶于水，便于反应后去除。
3. 反应条件调控
反应通常在pH 7.5-8.5的缓冲液中进行，此pH范围保证氨基部分非质子化，提高亲核活性，同时保持蛋白质构象稳定。
温度控制在室温至37℃，以促进反应速率，避免蛋白质变性。
反应时间视具体实验需求调整，一般为数小时至过夜。
4. 反应选择性与定位
虽然赖氨酸残基分布较广，但由于空间构象和氨基暴露度不同，偶联位置具有一定选择性。
反应可能在多个位点发生，导致标记程度和均一性差异，需通过优化反应条件控制标记比例。
产品名称：CY5.5标记肌钙蛋白，Cy5.5-Calmodulin, CaM
纯度：95%+
规格：mg/g
用途：科研

状态：固体/粉末/溶液

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仅用于科研，不能用于人体。小编axc