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CY5-Fibrinogen,CY5标记纤维蛋白原
纤维蛋白原(Fibrinogen)是一种血浆糖蛋白,由α、β、γ三条多肽链组成,参与凝固和创伤修复过程。通过Cyanine 5(Cy5)标记形成Cy5-Fibrinogen,可用于生物学研究、血栓示踪及蛋白相互作用实验。其反应条件主要涉及偶联策略、缓冲体系、温度控制和纯化表征。
偶联策略Cy5-Fibrinogen通常通过Cy5-NHS酯与纤维蛋白原赖氨酸侧链氨基偶联。
偶联反应形成稳定的酰胺键,标记过程中需避免覆盖血凝活性中心,以保留蛋白功能。
缓冲体系与pH
偶联反应通常在PBS缓冲液或碳酸氢盐缓冲液中进行,pH控制在7.2–7.5。
中性或弱碱条件可提高NHS酯反应效率,同时保持蛋白构象稳定。
温度与反应时间
低温(4°C)或室温反应可防止蛋白变性。
反应时间通常为1–3小时,通过荧光强度或SDS-PAGE监控偶联进度。
摩尔比与标记效率
Cy5与纤维蛋白原的摩尔比一般控制在1:5至1:10,确保适度标记并保留生物功能。
过量标记可能导致蛋白聚集或功能受损,因此需要优化反应条件。
纯化与表征
透析:去除未反应的Cy5小分子。
凝胶过滤/分子筛层析:获得均一分子量分布的Cy5-Fibrinogen。
SDS-PAGE及荧光扫描:确认标记效率和蛋白完整性。
酶活性检测:验证血凝功能是否保留。
产品名称:CY5-Fibrinogen,CY5标记纤维蛋白原
纯度:95%+
规格:mg/g
用途:科研
状态:固体/粉末/溶液
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