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Cy5-siRNA,CY5标记小干扰RNA
小干扰RNA(siRNA)是一类长度约21–23个核苷酸的双链RNA,能够通过RNA干扰(RNAi)机制特异性降解靶mRNA,实现基因沉默。通过Cyanine 5(Cy5)标记形成Cy5-siRNA,可以实现荧光示踪、细胞内递送追踪以及RNAi活性分析。其反应机理主要涉及标记策略、偶联化学反应及分子稳定性。
偶联位点与化学策略Cy5标记通常选择siRNA的5’端或3’端末端的羟基或氨基作为偶联位点,避免影响双链结构和RNAi活性。
标记通常通过NHS酯或异氰酸酯与氨基末端形成稳定的酰胺键,或者通过硫醇基团形成巯基偶联,实现高效荧光附着。
选择末端标记的主要目的是保持siRNA的核心双链区完整,确保其在RISC(RNA诱导沉默复合体)中正常结合和识别靶mRNA。
反应机理细节
酰胺键偶联:Cy5-NHS酯在弱碱性缓冲液中与siRNA末端氨基发生亲核攻击,生成稳定的酰胺键,反应过程中放出NHS作为离去基团。
巯基偶联:在siRNA引入硫醇基团后,Cy5带有活性巯基可通过Michael加成或二硫键形成与siRNA末端偶联,反应温和且高选择性。
反应条件通常控制在低温(4–25°C)、弱缓冲体系(pH 7.0–7.5),以保持RNA双链结构的稳定性。
分子稳定性与荧光功能
标记后,Cy5位于末端,不干扰RNA干扰活性,同时引入远红荧光信号(激发λ≈650 nm,发射λ≈670 nm),可实时追踪siRNA在体内外分布。
荧光信号与分子浓度、缓冲体系、温度及光照条件相关,需要避免强光和端条件导致荧光淬灭。
产品名称:Cy5-siRNA,CY5标记小干扰RNA
纯度:95%+
规格:mg/g
用途:科研
状态:固体/粉末/溶液
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