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CY7-耐碱性蛋白A,r-ATPA,CY7标记耐碱性蛋白A,r-ATPA的合成步骤概述

时间:2025-09-03 11:38:43       浏览:61

CY7-耐碱性蛋白A,r-ATPA,CY7标记耐碱性蛋白A,r-ATPA的合成步骤概述

CY7-耐碱性蛋白A(recombinant Alkaline-Tolerant Protein A, r-ATPA)是通过将近红外荧光染料Cyanine7(CY7)偶联至耐碱性蛋白A形成的标记蛋白。耐碱性蛋白A是一种重组蛋白,结构稳定、耐高pH环境,常用于免疫分析和抗体结合研究。CY7标记赋予其近红外荧光性能,使其可用于生物成像和分子相互作用研究。

合成步骤概述:
蛋白准备
r-ATPA通过重组表达系统(如大肠杆菌)生产,经缓冲液洗脱和透析纯化。
蛋白溶液浓度控制在适宜范围(通常1–10 mg/mL),pH维持在7–8以保证活性残基未质子化。
染料活化与溶解
CY7通常以NHS酯或活性酯形式提供,可直接溶解于有机溶剂(如DMSO)或缓冲液中。
配制后需避光并控制浓度,防止光漂白和自聚集。
偶联反应
将活化的CY7与r-ATPA混合,保持适宜的摩尔比(一般为染料:蛋白=3–10:1),以控制标记密度。
反应在室温或略低温条件下进行数小时至过夜,充分偶联而不破坏蛋白折叠。
偶联过程中,缓冲液离子强度和pH调控有助于提高标记效率并减少非特异性反应。
纯化与去除游离染料
通过透析、凝胶过滤或超滤去除未反应的CY7染料。
纯化后标记蛋白溶液呈均一分散状态,荧光性能稳定。
表征与质量控制
UV-Vis和荧光光谱:确认CY7偶联成功及荧光强度。
SDS-PAGE或蛋白质色谱:检测蛋白完整性和偶联效果。
ζ电位与DLS:评估蛋白溶液稳定性和分散性。
应用特点
CY7-耐碱性蛋白A可在生物体系中稳定存在,适用于抗体结合分析、纳米载体表面标记及近红外成像。
耐碱性蛋白A的结构稳定性和CY7的荧光特性结合,使其可在高pH环境下保持功能。
产品名称:CY7-耐碱性蛋白A,r-ATPA
纯度:95%+
规格:mg/g
用途:科研

状态:固体/粉末/溶液


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