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CY3-dUTP,花菁染料CY3标记脱氧尿苷三磷酸

时间:2025-09-17 11:50:13       浏览:77
CY3-dUTP,花菁染料CY3标记脱氧尿苷三磷酸
Cy3-dUTP是将红橙色花菁染料Cy3标记至脱氧尿苷三磷酸(dUTP)分子上的荧光核苷酸衍生物。dUTP是DNA合成过程中可被DNA聚合酶掺入的核苷酸,通过Cy3标记,可实现DNA分子荧光标记、体外扩增产物追踪及荧光原位杂交(FISH)等实验。Cy3-dUTP吸收峰约为550 nm,发射峰约为570 nm,兼具高量子产率和光稳定性。
合成过程
功能化dUTP
为将Cy3标记到dUTP分子,通常在尿嘧啶基的5位引入氨基修饰(5-aminoallyl-dUTP),生成可与Cy3-NHS酯偶联的活性位点。该改性不影响dUTP的核苷酸识别能力和DNA聚合酶掺入效率。
偶联反应
将5-aminoallyl-dUTP与Cy3-NHS酯在pH 8.0–8.5的碳酸盐缓冲液中混合,进行酰胺化反应。氨基攻击NHS酯碳原子形成稳定的酰胺键,完成Cy3与dUTP的共价连接。反应温和(通常室温或4℃),避免核苷酸和染料降解。
反应优化
反应过程中通过调整Cy3与dUTP摩尔比及反应时间,优化标记效率。过高的标记密度可能影响dUTP的掺入效率,而低标记密度则影响荧光信号,因此需根据实验需求进行平衡。
纯化过程
去除未反应染料
反应完成后,通过离子交换柱或反相高效液相色谱(HPLC)去除未反应的Cy3-NHS及副产物。此步骤确保终产物为高纯度Cy3-dUTP,适合分子生物学实验。
质量验证
纯化后的Cy3-dUTP通过UV-Vis光谱(Cy3吸收峰≈550 nm)、荧光光谱(发射峰≈570 nm)及质谱确认结构。结合分析可确保Cy3成功偶联至dUTP的5位,并保持三磷酸结构完整。
应用优势
Cy3-dUTP可直接参与DNA合成、PCR扩增、荧光原位杂交及荧光标记DNA探针制备。其荧光性质稳定、掺入效率高,兼容多种体外扩增体系,为分子生物学研究提供可视化和定量分析手段。
总结
Cy3-dUTP结合了荧光标记和核苷酸功能,通过氨基偶联策略实现高效标记与纯化。其稳定性和兼容性使其在DNA标记、分子追踪及荧光分析中成为理想工具。
产品名称:CY3-dUTP,花菁染料CY3标记脱氧尿苷三磷酸
纯度:95%+
规格:mg/g
用途:科研

状态:固体/粉末/溶液


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