CY5.5-Protein-A，菁染料Cy5.5标记蛋白A的反应机理
CY5.5-Protein A是一种将近红外荧光染料CY5.5与蛋白A偶联的功能性标记分子。蛋白A是一种来自金黄色葡萄球菌的免疫球蛋白结合蛋白，能够特异性结合IgG的Fc段，在免疫检测、抗体纯化及生物传感器构建中具有重要作用。CY5.5提供激发约675 nm、发射约695 nm的近红外荧光信号，减少生物体系背景干扰，适合体内成像及深层组织观察。
结构合成与偶联方法：
活化染料选择：
CY5.5通常以NHS酯形式活化，用于与蛋白A上的赖氨酸残基N端氨基形成稳定的酰胺键。
在某些设计中，也可使用Maleimide形式标记蛋白中的巯基，实现位点选择性偶联。
偶联反应机理：
NHS酯羧基碳被蛋白A氨基的孤对电子进攻，形成四面体中间体，随后NHS离去生成稳定的酰胺键。
反应温和，通常在pH 7.4–8.5的缓冲液中进行，室温轻轻搅拌2–4小时，保证蛋白结构不受破坏。
蛋白结构与功能保持：
偶联过程中通过控制染料与蛋白摩尔比（通常1:5~1:10），避免过量染料导致蛋白构象变化或功能丧失。
CY5.5标记后的Protein A仍能结合IgG的Fc段，维持其的结合能力。
纯化与表征：
反应后使用透析、凝胶过滤或高速离心去除未反应的CY5.5-NHS。
SDS-PAGE与荧光扫描可检测标记产物，确认标记效率。
UV-Vis与荧光光谱用于评估染料偶联量及光学特性。
应用优势：
高灵敏度检测：CY5.5近红外信号在生物样品中背景低，适合免疫分析及体内成像。
可视化追踪：标记后的Protein A可用于荧光免疫沉淀、免疫成像和动态监测。
结构稳定性：偶联条件温和，蛋白功能保持良好。
实验灵活性：可与不同抗体体系组合，扩展生物分析应用。
产品名称：CY5.5-Protein-A
纯度：95%+
规格：mg/g
用途：科研

状态：固体/粉末/溶液

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仅用于科研，不能用于人体。小编axc