SYTO-62的反应步骤
SYTO-62 是一种高亲水性、红色荧光染料，激发峰约 652 nm，发射峰约 676 nm，常用于细胞核、细胞质或核酸染色。SYTO 系列染料具有高度细胞渗透性，可穿过活细胞膜而不破坏细胞功能，其荧光强度在与核酸结合后增强，信噪比高。SYTO-62 结构中含芳环与杂环共轭体系，通过静电作用和嵌入结合与 DNA 或 RNA 高选择性结合。
反应步骤与染色机理
样品准备
细胞：取对数生长期的细胞，用PBS缓冲液清洗，去除培养基中的荧光干扰物质。
组织或固定细胞：可用4% PFA固定，随后洗脱残余固定液。
SYTO-62 溶液配制
将SYTO-62溶解于DMSO或PBS缓冲液中，一般制备10–50 μM储备液。
在实验使用前进行适当稀释（如0.5–5 μM），保证信号适中且避免细胞。
染色反应
将细胞或组织与稀释后的SYTO-62溶液孵育，时间一般为5–30分钟，室温或37℃孵育。
SYTO-62 可自由穿膜进入细胞，并嵌入DNA或RNA的双螺旋结构中，通过 π–π 堆积与静电相互作用增强荧光。
洗脱与去背景
染色后用PBS或其他适宜缓冲液轻轻洗涤，去除未结合的自由染料。
洗涤次数和缓冲液体积需控制，避免染料损失或背景信号增加。
检测与成像
使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪，激发652 nm，收集发射信号676 nm。
可与其他荧光探针多重标记，实现多通道成像。
SYTO-62 荧光增强机理
SYTO-62 与核酸结合后，限制了分子内旋转和振动，使非辐射衰减减少，量子产率提高。
荧光增强因子可达到10–20倍，信号明显，适合低拷贝核酸或稀少细胞的检测。
结合选择性强，不与蛋白质或脂质反应，避免非特异背景。
注意事项
对活细胞染色时需控制染料浓度和孵育时间，避免光和染料诱导细胞凋亡。
对固定或渗透化细胞，可适当延长孵育时间，提高染色均匀性。
可与其他波段染料联合使用，进行多重染色和FRET实验。
产品名称：SYTO-62
纯度：95%+
规格：mg/g

用途：科研

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仅用于科研，不能用于人体。小编axc