Calcein AM 是一种非荧光的酯化物，在活细胞内可被细胞内酯酶水解为绿色荧光的 Calcein。活细胞由于完整的细胞膜和功能活性的酯酶存在，可有效将 Calcein AM 转化为可发射 515–530 nm 荧光的 Calcein，使活细胞呈现绿色荧光信号。PI 是一种红色荧光核酸染料，不能穿透完整细胞膜，但可进入膜受损或死亡的细胞，与 DNA 和 RNA 结合后发射 620–650 nm 荧光，因此用于标记死亡细胞。两者组合使用，即可同时对活细胞和死细胞进行区分与定量。

该试剂盒操作简便，染色过程快速且无需复杂洗涤步骤。通常将细胞培养物孵育于含 Calcein AM 和 PI 的染色液中，经过 10–30 分钟即可观察到活细胞绿色荧光和死亡细胞红色荧光信号，可通过荧光显微镜或多通道成像系统进行分析。Calcein AM/PI 双染的结果可直观呈现细胞生存状态，适合用于药物毒性筛选、细胞活力监测及各类细胞处理效果评估。

试剂盒中的各组分稳定性较高，但建议避光保存并低温储存。使用时应注意避免重复冻融，以保证染色效果与荧光强度。该工具因其快速、灵敏和可视化特性，已成为细胞生物学、药理学及生物医学研究中常用的细胞活力评估手段。

总的来说，Calcein AM/PI 细胞双染试剂盒是一种高效、直观的活/死细胞评估方法，结合绿色 Calcein 和红色 PI 信号，实现对细胞存活状态的同时标记与分析，为科研实验提供可靠的数据支撑。