生物素-羟脯氨酸（Biotin-Hyp, Biotin-羟脯氨酸）是一种由天然氨基酸羟脯氨酸（Hydroxyproline, Hyp）与生物素（Biotin）通过共价偶联形成的功能化分子。羟脯氨酸是一种脯氨酸的羟基化衍生物，含有 α-氨基、羧基以及环状羟基侧链，广泛存在于胶原蛋白及其他蛋白质中，参与维持蛋白质结构稳定性和分子间相互作用。生物素是一种小分子维生素，含有内酰脲环和羧基官能团，能够与链霉亲和素（Streptavidin）或亲和素修饰载体高选择性结合。通过偶联形成 Biotin-Hyp，分子不仅保持羟脯氨酸的化学特性，同时赋予生物识别功能，为蛋白质标记、分子捕获及生化研究提供理想工具。

化学组成与结构特点方面，Biotin-Hyp 分子主要由三部分组成：羟脯氨酸核心、连接桥及生物素末端。羟脯氨酸核心保留 α-氨基、羧基和侧链羟基，为化学偶联提供反应位点。连接桥通常为羰基或柔性短链片段，用于分隔羟脯氨酸核心与生物素末端，减少两部分之间的空间干扰。生物素末端保留内酰脲环和羧基官能团，提供高选择性结合能力，可用于链霉亲和素修饰载体或荧光探针结合。整体分子兼具水溶性和一定疏水性，适用于缓冲体系和生物体系。

纯化方法方面，Biotin-Hyp 的偶联产物通常通过以下步骤获得高纯度：

1. 反应后粗提取：偶联反应完成后，通过有机溶剂或缓冲体系萃取去除未反应的生物素活化试剂及羟脯氨酸残留物。

2. 色谱分离：使用高效液相色谱（HPLC）或硅胶柱层析，根据极性差异分离偶联产物和未反应物。水相缓冲体系或有机溶剂梯度可优化产物分离效率。

3. 洗脱与回收：通过梯度洗脱，收集目标产物，蒸发溶剂或冷冻干燥获得干燥固体产物。该方法能够显著提高 Biotin-Hyp 的纯度并保持分子完整性。

表征方法方面，Biotin-Hyp 可通过多种分析手段确认结构和纯度：

1. 质谱（MS）分析：通过质谱可准确测定偶联产物的分子量，确认羟脯氨酸与生物素的偶联是否成功。

2. 核磁共振（NMR）：^1H 和 ^13C NMR 可用于验证羟脯氨酸核心、连接桥及生物素末端的化学结构，确保反应位点正确，分子结构完整。

3. 红外光谱（IR）：IR 可检测羰基、羟基及酰胺键的振动特征峰，进一步确认偶联键形成情况。

4. 高效液相色谱（HPLC）：用于分析产物纯度，结合紫外检测器或荧光检测器，可定量评估 Biotin-Hyp 的纯度及杂质水平。

5. 紫外-可见光谱（UV-Vis）：可分析生物素和羟脯氨酸的吸收特性，为后续生物应用提供基础光学数据。

优势与应用：通过纯化和表征获得的高纯度 Biotin-Hyp 在化学和生物研究中具有显著优势：

• 可用于蛋白质和多肽标记，实现高选择性捕获；

• 可通过生物素-链霉亲和素体系实现分子示踪和定位；

• 偶联策略温和，保持羟脯氨酸环结构完整，适合生物体系实验。

厂家：瑞禧生物

产品目录

CY5-D-Alanine CY5标记D-丙氨酸
Cy5-dATP
CY5-Daunorubicin CY5柔红霉素
CY5-Deoxycholic acid CY5标记脱氧胆酸
CY5-D-Glutamic Acid CY5标记D-谷氨酸
Cy5-DIBA
CY5-Doxorubicin CY5阿霉素