Sulfo-Cy5.5-FAPI-4（磺化-Cy5.5-成纤维细胞活化蛋白抑制剂-4）是一种将近红外荧光染料Sulfo-Cy5.5与FAPI-4（Fibroblast Activation Protein Inhibitor-4）偶联形成的功能化分子，广泛应用于肿瘤微环境成纤维细胞靶向成像、药物递送追踪及多功能实验平台构建。在化学研究和实验应用中，纯化与表征是确保偶联产物质量、荧光性能稳定以及靶向功能完整的重要步骤。Sulfo-Cy5.5提供激发波长约675–685 nm、发射波长约695–705 nm的近红外荧光，磺酸盐修饰赋予良好水溶性和生物相容性，而FAPI-4部分保留了特异性结合FAP酶的功能基团。

纯化方法
Sulfo-Cy5.5-FAPI-4偶联反应完成后，体系中通常含有未反应的Sulfo-Cy5.5活性酯、自由FAPI-4以及可能的低分子副产物，这些杂质需去除以获得高纯度的偶联产物。常用纯化方法包括凝胶过滤、透析和反相高效液相色谱（HPLC）。

凝胶过滤利用分子量差异进行分离。偶联产物的分子量明显高于未反应染料，通过聚合物凝胶柱可有效分离Sulfo-Cy5.5-FAPI-4和低分子量杂质。透析同样依赖分子量选择性，适用于大量水溶性产物的纯化，可将小分子杂质透过半透膜排出，同时保留目标产物在缓冲液中。

反相高效液相色谱（HPLC）是最常用的精密纯化手段。通过C18反相柱和梯度洗脱溶剂体系（通常为水-乙腈体系，添加微量三氟乙酸或磷酸盐缓冲液调节pH），可实现Sulfo-Cy5.5-FAPI-4与未反应染料及副产物的高分辨率分离。HPLC同时可提供纯度定量信息，通过检测峰面积和分离度评估偶联产物质量。纯化后的产物通常收集于含有缓冲液或有机溶剂的水溶性体系中，以保持稳定性和生物相容性。

表征方法
Sulfo-Cy5.5-FAPI-4的表征主要包括光学性质、分子结构确认以及偶联效率评估。光学性质可通过紫外-可见光谱和荧光光谱测定。紫外-可见光谱可显示Cy5.5特征吸收峰，确认染料骨架完整；荧光光谱测定则显示激发波长与发射波长范围，并评估荧光强度与量子产率，保证产物在生物实验中的可视化性能。

分子结构确认常通过质谱（MS）或高分辨质谱（HR-MS）进行。通过检测分子离子峰和偶联产物特征峰，可以确认Sulfo-Cy5.5-FAPI-4分子完整性及偶联成功。对于复杂体系，还可结合核磁共振（NMR）分析，验证关键官能团的存在及连接方式。

偶联效率评估可以通过比色法或荧光强度比较实现。通过测定反应前后自由FAPI-4或Sulfo-Cy5.5含量变化，结合荧光强度定量分析，即可计算偶联率。高偶联效率通常与纯化后的分子均一性和实验可重复性密切相关。

纯化和表征过程的优化还需考虑溶剂、pH和温度条件。水溶性磺化Cy5.5赋予分子在水相中良好分散性，减少非特异性吸附和聚集，保证纯化效率和荧光性能稳定。缓冲液pH一般控制在7–8.5范围，既保护FAPI-4骨架稳定，又保证Cy5.5光学性能不受影响。温和温度可减少偶联产物降解或光漂白风险。

厂家：瑞禧生物

产品目录

Cyanine7.5-PEG-NHS，CY7.5-聚乙二醇-活性酯的
Cyanine7.5-PEG-MAL，CY7.5-聚乙二醇-马来酰亚胺的
Cyanine7.5-PEG-Alkyne，CY7.5-聚乙二醇-炔基的
Cyanine7.5-PEG-COOH，CY7.5-聚乙二醇-羧基的
CY7.5-Clarithromycin，CY7.5克拉霉素的