AF660 C5 马来酰亚胺与 AF660 C2 马来酰亚胺是以近红外荧光团为核心、在分子末端引入马来酰亚胺反应性基团的标记试剂。AF660 指示吸收和发射峰位于近红外区域的荧光染料骨架，因其较长波长发射减少生物样品自发荧光干扰而常用于细胞成像、蛋白标记和多通道荧光检测。C2 与 C5 区别在于连接荧光核与马来酰亚胺的碳链长度，C2 表示短链（约两碳），C5 表示较长的五碳间隔。链长的差异会影响标记后配体的空间位阻、柔性和水溶性，从而在目标分子结合位点、跨膜穿透性或多色成像时表现出细微差别。

马来酰亚胺是一种常用的巯基选择性反应基团，在中性至微碱性条件下能与蛋白质或小分子巯基（半胱氨酸或巯基修饰的寡核苷酸）发生快速、特异的加成反应，生成稳定的硫代马来酰亚胺连接。将马来酰亚胺直接引入到 AF660 染料一端，可以获得既具有良好光学性能又可用于巯基定向标记的试剂，用于特异性修饰蛋白、抗体、核酸或纳米结构表面。

制备方法

总体思路为以 AF660 的羧基或活化酯衍生物为出发物，通过胺耦合将含马来酰亚胺的胺连接子连接到染料上。针对 C2 与 C5，两者的区别仅在于所用的氨基马来酰亚胺连接子长度不同，常见的连接子为氨基乙基马来酰亚胺（C2）或氨基戊基马来酰亚胺（C5）。制备流程可分为三个主要步骤：合成或购得带羧基的 AF660 出发物，制备或购得带末端氨基的马来酰亚胺连接子，胺偶联反应与纯化表征。

准备工作：选择干燥溶剂与无水操作以保护马来酰亚胺基团不被水解。马来酰亚胺对强酸或强碱及高温敏感，且易在水相中发生开环，因此合成与纯化应尽量在中性或微碱性条件并在低温下进行，避免长时间暴露于水或基础性介质。

活化与偶联：若出发物为 AF660 的羧酸衍生物，可在极性有机溶剂中先将羧酸转化为活化酯。常用方法是使用碳二亚胺类的耦合试剂将羧酸活化为 N-羟基琥珀酰亚胺酯，随后用带有末端氨基的马来酰亚胺连接子进行胺交换形成酰胺键。若出发物已为 NHS 酯型 AF660，则可直接与马来酰亚胺胺连接子在有机溶剂或含少量极性共溶剂的条件下进行反应，适量使用有机碱（如二异丙基乙胺）以促进反应，但需控制碱量以免引起马来酰亚胺水解或副反应。反应温度一般控制在冰浴到室温范围，以提高选择性并降低副生成物。

保护与脱保护（如适用）：若使用的马来酰亚胺连接子在合成或储存阶段以保护态存在，需在偶联后或特定时点完成脱保护，脱保护步骤应选用温和条件，避免破坏染料发色团或马来酰亚胺结构。

纯化：偶联反应结束后，采用有机相萃取或凝胶过滤去除小分子副产物，然后通过反相高效液相色谱 HPLC 进行精制。HPLC 可根据吸收波长监测染料组分并收集目标产物峰。纯化过程中应尽量避光以防止染料光降解。

表征：纯化产物需通过质谱确认分子量，核磁共振（在可行的情况下）用于核结构确认，同时测定紫外可见吸收谱和荧光发射谱以确认光学性质未被破坏。测定产物在生理缓冲液中的稳定性和在不同 pH 下的巯基反应活性，以评估其标记性能。

厂家：瑞禧生物

产品目录

CY7标记琼脂 CY7-Agarose
CY7标记犬尿喹啉酸 CY7-犬尿喹啉酸
CY7标记人甲状腺球蛋白 CY7-Thyroglobulin-Human
CY7标记溶菌酶 CY7-Lysozyme
CY7标记溶血磷脂酰胆碱 CY7-LPC
CY7标记乳清蛋白 Cy7-lactalbumin