AF633 C5 马来酰亚胺是以近红外发色团为核心并在分子末端引入五碳间隔马来酰亚胺基团的标记试剂。该染料保留了AF633类染料的光学性质，吸收和发射位于红光至近红外波段，适合深层成像和多通道荧光检测。C5 表示发色团与马来酰亚胺之间通过五个碳构成的连接子，这一长度兼顾了空间柔性和反应效率，有利于在标记蛋白或其他含巯基的生物分子时获得可控的偶联位点和合理的构象。马来酰亚胺末端能够选择性地与半胱氨酸侧链或含巯基的修饰位点发生加成反应，生成稳定的硫代马来酰亚胺连接，从而实现定向标记。

合成路线

总体合成思路分为三段，第一段制备或购得AF633的羧酸型前体，第二段合成带五碳胺基的马来酰亚胺连接子，第三段将连接子与染料偶联并纯化表征。

第一段 染料出发物
通常以带羧酸官能团的AF633衍生物为起始物。如果起始物为游离羧酸，可先用常规耦合试剂将其活化为NHS酯形式以便后续胺偶联。羧酸活化可采用碳二亚胺类试剂在有机溶剂中操作，生成容易与胺反应的活性中间体。

第二段 马来酰亚胺连接子合成
先用戊二胺或5-氨基戊醇与maleic anhydride反应生成马来酰胺酸中间体，随后通过脱水环化制得马来酰亚胺骨架。为便于后续偶联，通常在氨基端引入氨基保护基团，例如Boc保护，以避免在环化或后续步骤中发生副反应。环化脱水可以采用温和的脱水试剂或有机酸酐实现。得到保护态的5-氨基戊基马来酰亚胺后，通过酸性条件去除保护基团得到带游离胺的连接子。

第三段 偶联与纯化
将带游离胺的C5马来酰亚胺连接子与AF633的活化酯在有机或混合溶剂中进行胺酰化反应，以形成染料與连接子之间的酰胺键。偶联时需控制溶剂的水分和反应体系的酸碱度，避免马来酰亚胺环被水解或开环。为降低副反应的发生，宜在较低温度下进行并使用少量有机碱作为中和剂。偶联结束后，采用固相萃取和凝胶过滤去除小分子杂质，最后用反相高效液相色谱进行精制，依据染料的吸收波长收集目标产物峰。

表征与储存
纯化产物应通过质谱验证分子量，通过紫外可见光谱和荧光谱确认光学性质未被破坏。必要时使用核磁共振对结构进行进一步确认。制品建议制成高浓度干燥粉末或在阴暗低温条件下保存于含少量有机溶剂的分装液中，避免长时间暴露于碱性水溶液和光照，以维护马来酰亚胺的反应活性。

厂家：瑞禧生物

产品目录

CY7标记乳酸 CY7-Lactic-acid
CY7标记乳铁蛋白 CY7-Lactoferrin
CY7标记山梨糖 CY7-Sorbose
CY7标记视黄醇结合蛋白 Cy7-Retinol Binding Protein
CY7标记双磺酸酯 CY7-DiSE，diSO3，
CY7标记双乙基酯 CY7-Di-Et