TAMRA-NHS（Tetramethylrhodamine N-hydroxysuccinimide ester，中文名称为四甲基罗丹明-琥珀酰亚胺酯）是一种常用于生物分子标记的活性荧光染料衍生物。它是将四甲基罗丹明（TAMRA，Tetramethylrhodamine）通过琥珀酰亚胺活化形成的酯类化合物，能够特异性地与含伯胺（–NH₂）基团的分子发生酰胺化反应，从而实现荧光标记。TAMRA-NHS兼具强烈的橙红色荧光、高量子产率及良好的光稳定性，被广泛用于标记蛋白质、肽、核酸及其他含氨基官能团的分子，以便在荧光显微成像、流式细胞分析、分子探针构建及生物检测体系中使用。

TAMRA分子属于罗丹明家族染料，其发色团结构为螺内酯环开环形式，具有较强的共轭体系，使其在可见光区表现出明亮的橙红色荧光。其典型的激发波长约为540至555纳米，发射峰约为575至590纳米，能够与常见的绿色或远红通道染料区分开，适用于多重荧光实验。与传统荧光素（FITC）相比，TAMRA具有更高的光稳定性和较低的pH敏感性，因此在长时间成像或高光照实验条件下表现更加稳定。TAMRA-NHS则通过引入NHS（N-hydroxysuccinimide）活化酯基，使其可在温和条件下与伯胺发生定向共价键合，是TAMRA衍生物中最常用的反应型标记剂。

反应条件

TAMRA-NHS酯的反应机理基于酰胺键形成反应。其NHS酯活性基团可与伯胺类化合物（如赖氨酸残基、蛋白质末端氨基或胺修饰的寡核苷酸）发生亲核取代反应，生成稳定的酰胺键，同时释放N-羟基琥珀酰亚胺作为副产物。该反应通常在弱碱性环境中进行，以促进氨基去质子化、增强亲核性，从而提高反应效率。

1. 反应溶剂与体系选择
TAMRA-NHS通常溶于无水有机溶剂中，例如二甲基亚砜（DMSO）、二甲基甲酰胺（DMF）或乙腈（ACN）。这些溶剂能够有效溶解疏水性较强的TAMRA结构，并防止水分引发NHS酯水解。待标记的生物分子通常溶于缓冲体系中，例如0.1 M碳酸盐缓冲液（pH 8.3–8.5）或0.1 M磷酸盐缓冲液（PBS, pH 7.8–8.2）。为保证反应效率，常将TAMRA-NHS的有机溶液少量加入到生物分子溶液中，使有机溶剂体积分数保持在10%以下，以防止蛋白质变性。

2. pH与温度控制
最佳反应pH通常为8.0至8.5。在此范围内，氨基的亲核性较强，而NHS酯的水解速率尚处于可控范围内。若pH过低，氨基质子化导致反应效率下降；若pH过高，则NHS酯水解加速，造成染料浪费。反应温度一般设定在室温（20–25℃），反应时间约为30分钟至2小时。对于敏感生物分子，可适当降低温度（如4℃反应过夜），以避免构象变化或活性损失。

3. 反应比例与终止处理
通常TAMRA-NHS与目标分子的摩尔比设定在5:1至20:1之间，具体取决于待标记分子的氨基数量和所需标记密度。反应完成后，可加入过量的乙醇胺、Tris或甘氨酸等含氨基的小分子来封闭未反应的NHS酯基团，以防止后续非特异性标记或自反应。反应结束后，可通过透析、凝胶过滤或高效液相色谱（HPLC）去除游离染料和副产物，获得纯净的TAMRA标记物。

4. 注意事项与稳定性
TAMRA-NHS在潮湿环境中容易水解失活，因此应在干燥、避光条件下保存，低温（–20℃）下可稳定数月。使用时应在惰性气体（如氮气或氩气）下操作，并避免长时间暴露于空气中。溶解后建议即时使用，以确保反应效率和标记一致性。由于TAMRA为光敏分子，反应与纯化过程均应在弱光或避光条件下进行。

厂家：瑞禧生物

产品目录

CY7标记虾过敏原 CY7-Penaeus-Allergen
CY7标记虾原肌球蛋白 Cy7-Shrimp-tropomyosin
CY7标记纤维连接蛋白 CY7-Fibronectin，FN，
CY7标记相思子毒素荧光素标记物 CY7-相思子毒素荧光素标记物
CY7标记小麦谷蛋白 CY7-Wheat-Gliadin