5-TAMRA-NHS（5-Carboxytetramethylrhodamine N-hydroxysuccinimide ester，中文名称为5-TAMRA琥珀酰亚胺酯）是一种广泛应用于生物分子荧光标记的活性染料衍生物。它是由五号羧基位置的四甲基罗丹明（TAMRA）通过琥珀酰亚胺（NHS）活化形成的酯类化合物，可特异性与含伯胺（–NH₂）基团的生物分子发生酰胺化反应，从而实现荧光标记。5-TAMRA-NHS保留了TAMRA的优异光学性质，表现为橙红色荧光，激发峰约为540至555纳米，发射峰约为575至590纳米，具有高量子产率、良好光稳定性以及在生物样品中的较低pH依赖性。由于其荧光明亮且特异性高，5-TAMRA-NHS被广泛应用于蛋白质、肽、寡核苷酸和其他含氨基分子的标记、追踪和定量分析。

反应机理

5-TAMRA-NHS的反应机理基于NHS酯与伯胺的亲核取代反应，核心是形成稳定的酰胺键。在反应体系中，NHS酯活性基团是一个良好的离去基团，能够被亲核胺攻击，从而生成共价键连接的标记产物。具体过程如下：

首先，待标记分子的伯胺基团在弱碱性条件下部分去质子化，形成游离氨基的亲核形式。去质子化的氨基攻击TAMRA-NHS分子的碳酰碳（C=O），形成一个四中心过渡态。在该过渡态中，NHS基团作为良好离去基团被置换，同时生成稳定的酰胺键，将TAMRA荧光团共价连接到目标分子上。NHS离去后生成N-羟基琥珀酰亚胺作为副产物。整个反应通常在温和条件下进行，无需极端温度或强酸强碱环境，从而保持生物分子的结构和活性。

反应效率与多种因素相关。首先，pH值的控制非常重要，最佳反应范围通常在pH 8.0至8.5。在此范围内，氨基具有较强亲核性，同时NHS酯的水解速率尚可控。如果pH过低，氨基质子化导致亲核攻击效率下降；如果pH过高，NHS酯会快速水解，生成非活性羧酸，从而降低标记效率。其次，溶剂的选择也影响反应速率和生物分子稳定性。TAMRA-NHS可溶于无水极性溶剂，如DMSO或DMF，生物分子可溶于缓冲液中，反应通常采用有机/水相混合体系，以兼顾溶解性和生物活性。

在反应中，温度和时间也需合理控制。一般在室温条件下反应30分钟至2小时即可完成标记。对于热敏感蛋白或酶，可选择4℃反应过夜，以保证结构稳定性和活性保存。反应比例方面，通常TAMRA-NHS与目标分子的摩尔比在5:1至20:1之间，可根据氨基数量和所需标记密度进行调整。反应完成后，可加入过量含氨基的小分子（如甘氨酸、Tris或乙醇胺）封闭未反应的NHS酯，防止后续非特异性结合。

纯化过程中，一般采用透析、凝胶过滤或高效液相色谱（HPLC）去除游离TAMRA-NHS及副产物，以获得高纯度标记产物。由于TAMRA对光敏感，反应及纯化过程应避光操作，并在干燥低温条件下保存，防止染料光漂白或NHS酯水解。

厂家：瑞禧生物

产品目录

CY7标记小麦胚芽凝集素 CY7-Wheat germ agglutinin
CY7标记血红蛋白 CY7-Hemoglobin
CY7标记血蓝蛋白 CY7-Keyhole Limpet Hemocyanin，KLH，
CY7标记血凝素 CY7-Hemagglutinin
CY7标记血清前白蛋白，PA， Cy7-血清前白蛋白，PA，
CY7标记伊维菌素 CY7-Ivermectin