蟾毒它灵（Bufalin, BUF）是一种来源于蟾蜍分泌物的心甙类小分子化合物，其结构由甾体骨架、糖苷及羟基或羧基取代基组成，具有较高的化学活性。通过与生物素（Biotin）共价偶联，可以将BUF标记为功能分子，形成Biotin-Bufalin，用于分子追踪、靶向识别及生物化学研究。生物素分子结构包含五元内酰胺环和戊酸侧链末端羧基或氨基，可与BUF的羟基或胺基形成稳定的共价连接，从而实现功能整合。

Biotin-Bufalin的合成通常依赖羟基或胺基与生物素活化羧基的偶联反应。典型方法是将生物素羧基通过EDC（1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺）/NHS（N-羟基琥珀酰亚胺）体系活化生成NHS酯中间体，活化后的羧基碳原子具有较强的电子缺陷性，易被BUF分子的羟基亲核攻击，从而形成酰胺键或酯键。该反应属于典型亲核加成机制：BUF羟基或氨基的孤对电子攻击活性碳原子，生成稳定共价键，同时释放NHS分子。反应通常在弱碱性缓冲液或极性有机溶剂中进行，以保证BUF甾体骨架的稳定性，避免糖苷部分降解或环化。

具体合成步骤包括以下阶段：

1. 生物素活化：将生物素溶解于适当有机溶剂中，通过EDC/NHS体系活化羧基生成活性NHS酯，为偶联提供高活性中心。

2. BUF溶液准备：将BUF溶解在极性有机溶剂（如DMSO或乙醇）中，确保羟基完全暴露，利于与活性NHS酯反应。

3. 偶联反应：将BUF溶液缓慢加入活化的生物素溶液中，轻柔搅拌数小时至过夜，促进羟基对活性碳的亲核攻击形成共价键。

4. 反应监控：通过高效液相色谱（HPLC）或薄层色谱（TLC）监控偶联进程，判断反应完成情况及副产物生成。

5. 纯化：利用反相HPLC或凝胶渗透色谱（GPC）纯化偶联产物，去除未反应的BUF、生物素及副产物。梯度洗脱可实现高纯度Biotin-Bufalin的获得。

6. 表征：纯化后的产物通过质谱（MS）确认分子量，核磁共振（NMR）确认BUF骨架和生物素的偶联结构；红外光谱（FTIR）可显示酰胺键或酯键的特征吸收峰，验证偶联的成功。

厂家：瑞禧生物

产品目录

RB- Sodium cholate 罗丹明标记胆汁酸
RB-，20S，-Protopanaxatriol 罗丹明标记20，S，-原人参三醇
RB6G-NHS，罗丹明6G-活性酯，
RB-Ampicillin 罗丹明标记氨苄青霉素
RB-Amyloid β-Peptide，1-42，，human， 罗丹明β-淀粉样多肽，1-42，