产品名称：iFluor 700 Styramide的制备方法
1. 关键反应条件与步骤
溶剂与pH控制：
溶剂：无水DMSO或DMF，需确保无水环境以避免水解。
pH：8.5-9.5（常用碳酸盐或磷酸盐缓冲液调节），促进氨基与活性酯的反应。
温度：室温（20-25℃）反应30-60分钟，具体时间需通过实验优化。
蛋白质标记优化：
蛋白质浓度：2-10 mg/mL（如抗体），浓度过低会导致标记效率下降。
染料/蛋白质比例：4-6:1（摩尔比），需通过梯度实验确定最佳比例，避免过度标记影响抗原结合能力。
纯化步骤：反应后通过透析、旋转柱或层析去除游离染料和杂质。
2. 储存与工作溶液配制
储存条件：
固体粉末：-20℃避光保存，避免反复冻融；分装小份可减少降解风险。
储备液（100X）：DMSO溶解后，-20℃避光保存，避免长期储存（活性可能降低）。
工作溶液（1X）：现配现用，含Styramide储备液（10 μL/mL）和H₂O₂储备液（10 μL/mL），需在2小时内使用，避免光降解。
实验操作流程：
细胞/组织固定与透化（如甲醛固定，Triton X-100透化）。
封闭内源性过氧化物酶（可选H₂O₂淬灭）和生物素（生物素封闭缓冲液）。
一抗孵育（4℃过夜或室温1小时）。
HRP标记二抗孵育（室温1小时）。
加入Styramide工作液，室温孵育5-10分钟（需优化时间以控制信号强度）。
洗涤后复染（如DAPI核染色）并封片。


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