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MB 594 NHS Ester,中文名称为MB 594 N-羟基琥珀酰亚胺酯,常用英文别名为MB 594 NHS、MB 594 SE,是一种高性能胺基反应性荧光标记试剂,核心结构由MB 594荧光染料与N-羟基琥珀酰亚胺活化酯共价连接而成,广泛应用于生物分子标记、荧光成像及生物分析研究领域,不属于临床治疗相关试剂。该化合物具有良好的亲水性和水溶性,分子结构中含有的负电荷磺基可有效提高水溶性、减少自猝灭,是单分子检测和高分辨率显微镜观察的理想试剂。
其制备过程主要分为两步,第一步是MB 594荧光染料的合成,以芳香族胺类化合物为起始原料,通过亲电取代反应引入荧光发色基团,经氧化、闭环反应形成MB 594核心骨架,再通过磺化反应引入磺基,提升水溶性,反应完成后经重结晶、柱层析纯化,得到高纯度的MB 594荧光染料。第二步是NHS酯官能团的偶联,将纯化后的MB 594荧光染料溶于无水二甲基亚砜(DMSO)中,加入过量的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和二环己基碳二亚胺(DCC),在室温避光条件下搅拌反应4-6小时,其中DCC作为缩合剂,促进MB 594分子中的羧基与NHS的羟基发生酯化反应,形成活化酯结构。
反应结束后,过滤去除反应生成的二环己基脲(DCU)沉淀,将滤液缓慢滴入冰乙醚中,析出白色固体,经离心、洗涤、真空干燥后,得到粗产物。粗产物再通过高效液相色谱(HPLC)进一步纯化,收集目标组分,真空干燥后获得高纯度的MB 594 NHS Ester。该化合物的储存条件严苛,需在-20℃干燥、避光环境下保存,避免频繁解冻和冷冻,使用时需用无水DMSO新鲜配制母液,防止水解失活。其化学反应特异性强,可在pH 7.0-9.0的缓冲体系中,与蛋白质、抗体、肽段等生物分子上的伯氨基高效反应,形成稳定的酰胺键,实现生物分子的荧光标记。

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