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一、定制内容
(一)可标记底物类型
1. 天然蛋白
○ 载体蛋白:牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、人血清白蛋白(HSA)。
○ *体/免疫蛋白:IgG、IgM、单克隆*体、多克隆*体。
○ 酶类:辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶(ALP)、葡萄糖氧化酶(GOD)、基质金属蛋白酶(MMP)。
○ 其他:转铁蛋白、纤连蛋白、凝集素(WGA、PNA、LEL)。
2. 重组蛋白
○ 原核表达(大肠杆菌)、真核表达(酵母、CHO细胞)重组蛋白、重组细胞因子、重组受体蛋白。
3. 多肽与生物大分子
○ 线性多肽、环肽、修饰肽;葡聚糖、壳聚糖、脂质体、纳米颗粒表面荧光修饰。
(二)荧光染料选择
染料系列 | 代表染料 | 激发/发射波长 | 荧光颜色 | 核心优势 | 适用场景 |
FITC | FITC | 495nm/519nm | 绿色 | 成本低、通用性强、偶联易 | 基础免疫荧光、细胞成像、流式分析 |
Cy系列 | Cy3、Cy5、Cy5.5、Cy7 | 550/570、649/670、675/707、750/770nm | 橙红、远红、近红外 | 亮度高、光稳定、多色适配 | 多色共定位、WB、活体浅层成像 |
Alexa Fluor | 488、555、594、647、750 | 495/519、555/565、590/617、650/665nm | 绿、橙、红、远红 | 水溶性好、pH稳定、高量子产率 | 共聚焦、活细胞长时示踪、高灵敏定量 |
(三)定制技术与参数
• 标记位点:氨基标记(NHS酯,蛋白通用)、巯基标记(马来酰亚胺,位点特异)、糖基标记(高碘酸氧化,*体Fc段)。
• 标记比例(D/P值):1:11:15可调,常规1:11:10,平衡荧光强度与蛋白活性。
• 纯度与活性:蛋白纯度≥95%,活性保留≥90%,无游离染料、内毒素、蛋白酶残留。
• 剂型规格:液态(PBS缓冲液)、冻干粉;ug级(预实验)、mg级(常规实验)、g级(大规模研发)。
(四)细分定制服务
1. 单荧光标记定制:单一染料(FITC/Cy5/Alexa Fluor)标记单一蛋白,基础定制,性价比高。
2. 多色共标记定制:2~3种不同波长染料(如FITC+Cy5+Alexa Fluor 647)标记同一蛋白,用于多靶标共定位、荧光共振能量转移(FRET)研究。
3. 位点特异性标记:定点标记活性位点外区域,避免影响蛋白结合、催化活性。
4. 特殊功能定制:低内毒素(<0.1EU/mg)、高稳定性、磺化修饰(提升水溶性)、双功能标记(荧光+生物素/螯合剂)。
二、参考文献
1. 神经科学研究
○ 文献:Hypoxia regulates Schwann cell proliferation and myelination in injured peripheral nerves,Neuroscience Research, 2023, DOI: 10.1016/j.neuroscirep.2023.109452
○ 应用:采用FITC-神经丝蛋白*体,免疫组化示踪损伤神经轴突。
2. 标记方法优化
○ 文献:An Efficient Method for FITC Labelling of Proteins Using Tandem Affinity Purification,Biomedical Chromatography, 2024, DOI: 10.1002/bmc.5589
○ 应用:使用FITC标记试剂,优化工艺降低背景、提升活性保留。
3. 活体成像研究
○ 文献:Near-Infrared Fluorescence Imaging of Enzyme Activity in Living Subjects,Molecular Imaging and Biology, 2018, DOI: 10.1007/s11307-018-1206-9
○ 应用:Cy5/Alexa Fluor 750-酶标记物,小鼠体内72h酶活性示踪。
4. 多色免疫分析
○ 文献:Multiplexed Near-Infrared Fluorescence Imaging for Quantitative Protein Analysis,Nature Protocols, 2007, DOI: 10.1038/nprot.2007.434
○ 应用:Cy3-IgG+Alexa Fluor 647-亲和素,双标共定位检测。
5. 糖基成像研究
○ 文献:Fluorescent Labeling of Human Serum Albumin by Thiol-Cyanimide Addition,Analytical Chemistry, 2022, 94(7): 3111-3119
○ 应用:FITC-WGA,HeLa细胞膜糖基特异性成像。
三、具体产品与案例分享
(一)核心/定制产品
1. FITC系列
○ FITC-BSA(牛血清白蛋白)
○ FITC-转铁蛋白
○ FITC-WGA(小麦胚芽凝集素)
2. Cy5系列
○ Cy5-IgG(兔/鼠)
○ Cy5-BSA
○ Cy5-链霉亲和素
3. Alexa Fluor系列
○ Alexa Fluor 488-*体
○ Alexa Fluor 647-亲和素
○ Alexa Fluor 555-α-微管蛋白
(二)定制案例分享
案例1:FITC-转铁蛋白肿瘤细胞内吞研究
• 需求:某高校肿瘤实验室,探究肿瘤细胞靶向内吞机制,需绿色荧光、高活性转铁蛋白。
• 方案:FITC氨基标记,D/P=4:1,4℃避光反应12h,透析纯化,质控纯度96%、活性91%。
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