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Cyanine3 amine(CY3-NH2,Cy3-氨基,脂溶性CY3胺,CAS: 2247688-56-6)是一种发橘黄色荧光的花菁素类染料,其分子中含有伯胺基团,可与NHS酯、碳二亚胺活化的羧基及环氧化物等活性基团发生共价偶联。该化合物外观为红色粉末,分子量627.73,激发波长555 nm,消光系数高达150000 L·mol⁻¹·cm⁻¹,在水中溶解度中等,但在DMF、DMSO、甲醇等极性有机溶剂中溶解性优良。
CY3-NH2经典且不可替代的应用场景是核酸分子的荧光标记。由于其伯胺基团可与核酸合成中引入的氨基修饰碱基(如氨基己基修饰的dT或dU)通过稳定的酰胺键连接,研究者能够在PCR扩增、DNA测序、荧光原位杂交(FISH)等实验中获得高信噪比的荧光信号。Cy3的荧光亮度高、背景低,且对pH不敏感,在530至561 nm激光激发下配合TRITC滤片即可成像,适配绝大多数荧光显微镜平台。
从荧光显微镜技术的角度看,CY3-NH2是多色标记实验中的"黄金搭档"。其发射光谱与DAPI(蓝色)、FITC/Alexa488(绿色)以及Cy5/Alexa647(远红色)之间具有良好的光谱分离度,可轻松实现四色甚至五色同时成像。在单分子荧光追踪实验中,Cy3的高光稳定性使其成为全内反射荧光显微镜(TIRF)和超分辨率显微镜(如STORM、PALM)的常用探针。
此外,CY3-NH2也被广泛用于蛋白质与多肽的荧光标记。其伯胺可与蛋白质表面赖氨酸残基的ε-氨基或N端α-氨基反应,也可通过NHS酯交联策略实现定向标记。不过需注意,由于该染料为脂溶性,在纯水相标记反应中需加入DMF或DMSO作为共溶剂以确保充分溶解。储存条件为-20℃避光干燥保存,有效期可达24个月,运输时室温条件下可稳定3周,但须严格避光防潮。

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