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6-OG488-琥珀酰亚胺酯,6-OG488-SE,6-Carboxyfluorescein S

时间:2026-05-27 17:24:27       浏览:19

6-OG488-琥珀酰亚胺酯(6-OG488-SE,6-OG488 Succinimidyl Ester)是一种以羧基荧光素(6-Carboxyfluorescein,6-OG)为发色团、琥珀酰亚胺酯(SE/NHS Ester)为反应活性基团的荧光标记试剂。其英文别名包括6-Carboxyfluorescein SE和6-FAM SE(FAM即Fluorescein Amidite的缩写,6-OG与FAM在此语境下指代同一荧光素骨架)。该试剂专一性地与伯胺基团(-NH₂)反应,形成稳定的酰胺键,是生物化学和分析化学中最常用的胺基标记试剂之一。

从反应机理看,琥珀酰亚胺酯基团在弱碱性条件下(pH 7.5~8.5)与蛋白质赖氨酸残基的ε-氨基或N端α-氨基发生亲核取代反应,释放N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)副产物,生成共价连接的荧光-蛋白质偶联物。6-OG488的激发波长约为494nm,发射波长约为521nm,与标准FITC通道完全兼容,可直接在荧光显微镜、酶标仪和流式细胞仪上检测。与普通FITC相比,6-OG488-SE的羧基位置使其具有更好的水溶性和更低的pH敏感性,在酸性环境中荧光衰减更小。

在蛋白质标记实践中,6-OG488-SE的使用需要注意染料与蛋白质的摩尔比控制。通常推荐染料:蛋白质摩尔比为5:1至20:1,过高的标记度会导致荧光自淬灭和蛋白质活性丧失。标记反应一般在碳酸钠缓冲液(pH 8.3~8.5)中进行30~60分钟,反应终止后通过凝胶过滤柱或透析去除游离染料。标记后的蛋白质可用于酶活性检测、蛋白质定量(如BCA替代方案)、Western blot荧光检测以及单分子荧光追踪等实验。

在分析化学领域,6-OG488-SE还被用于标记抗体、凝集素和多肽,构建高灵敏度的荧光免疫检测试剂。与生物素-链霉亲和素系统相比,直接荧光标记方案步骤更少、背景更低,适合高通量筛选和微流控免疫分析平台。此外,该试剂的琥珀酰亚胺酯形式在干燥状态下相对稳定(-20°C避光保存可达12个月以上),溶解后需现配现用以避免水解失效,这是实验操作中需要特别注意的要点。


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