Biotin‑3‑Hydroxyanthranilic Acid，生物素‑3‑羟基‑2‑氨基苯甲酸，缩写 Biotin‑3‑HAA，是色氨酸代谢产物 3‑羟基‑2‑氨基苯甲酸经过生物素共价修饰得到的探针分子，将内源性代谢物骨架与生物素亲和标签结合，服务于代谢物相互作用组学的体外研究工作。3‑羟基‑2‑氨基苯甲酸属于犬尿氨酸通路下游芳香代谢物，苯环上同时排布氨基、羟基、羧基，多个活性位点可供化学修饰；生物素通过酰胺键接枝于氨基或者羧基位点，保留芳香母核的分子识别特征，同时赋予分子被链霉亲和素捕获的能力，为代谢物‑生物大分子互作筛选提供化学工具。

理化属性上，该化合物属于极性芳香衍生物，水溶性优于多数黄酮类生物素偶联物，可在中性 PBS 缓冲液中实现一定浓度溶解，也可兼容 DMSO 配置高浓度母液。芳香氨基结构容易被氧化，样品需要避光 2‑8℃密封保存，避免反复冻融，多次冻融会造成氨基氧化降解，降低探针活性。高分辨质谱可以确认完整分子分子量，核磁可以分辨苯环上特征芳香氢，验证修饰位点，液相色谱用于去除未反应游离原料，保障探针纯度，游离未偶联生物素杂质会竞争性抢占链霉亲和素结合位点，会直接降低后续捕获实验效果，需要严格去除。

该探针核心应用集中于代谢物互作组学体外筛选。3‑HAA 作为色氨酸代谢通路重要小分子，能够和多种胞内蛋白发生相互作用，Biotin‑3‑HAA 可以模拟天然代谢物结构，与细胞裂解液共同孵育，探针和靶蛋白结合之后，利用链霉亲和素磁珠完成复合物捕获，洗脱得到结合蛋白，再通过质谱鉴定，批量筛选可以和该代谢物发生结合的蛋白靶点，解析犬尿氨酸代谢通路下游分子的作用网络。相较于传统小分子筛选手段，生物素标签的引入实现无标记蛋白复合物富集，提升低丰度互作蛋白检出概率。

除此之外，该探针还可以用于体外蛋白结合定量分析，将探针固定于链霉亲和素包覆传感芯片，开展 SPR 表面等离子体共振测试，测定代谢物与靶蛋白之间的结合亲和力、结合解离速率，量化二者相互作用强弱。在蛋白样本孵育实验中，可设置不加探针的对照组，排除蛋白与磁珠非特异性吸附干扰。该探针仅用于体外生化体系，芳香氨基容易在强氧化缓冲条件下失活，实验缓冲液尽量规避强氧化剂。该分子搭建起代谢小分子与亲和捕获组学之间的桥梁，为色氨酸代谢通路分子机制研究提供标记工具。

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