Biotin‑XX Cholera Toxin Subunit B，生物素‑XX‑霍乱毒素 B 亚基，即 Biotin‑XX‑CTB，是重组无毒霍乱毒素 B 五聚体，通过 XX 长柔性连接臂共价偶联生物素得到蛋白偶联试剂；CTB 本身为五聚体蛋白，不具备毒素 A 亚基毒性，可高特异性识别细胞膜表面 GM1 神经节苷脂糖脂受体，XX 长间隔臂可以拉开生物素与蛋白表面距离，消除蛋白空间位阻，保障生物素可以高效结合链霉亲和素，是细胞生物学、神经示踪领域的经典工具试剂。

XX 代表长链柔性连接臂，相较于直接生物素标记 CTB，加长间隔臂可以规避蛋白表面氨基酸残基造成的空间遮挡，链霉亲和素四聚体可以不受阻碍结合生物素标签，显著提升后续检测、信号放大效率。该重组蛋白为冻干粉末形态，复溶推荐使用中性 PBS 缓冲液，避免强酸强碱，高温会造成 CTB 五聚体解聚，丧失 GM1 受体结合活性，储存条件 2‑8℃，分装冻存避免反复冻融；偶联工艺将生物素‑XX 接枝于蛋白赖氨酸残基，成品会控制生物素接枝摩尔比，修饰过高会破坏蛋白空间构象，降低与 GM1 糖脂结合能力，修饰过低则信号不足，一般通过 HABA 测定法确定每个 CTB 五聚体上平均生物素标记数目。

该试剂最典型用途为细胞膜脂筏标记。GM1 神经节苷脂大量富集在细胞膜脂筏微区，Biotin‑XX‑CTB 孵育细胞后特异性锚定脂筏区域，后续加入链霉亲和素‑荧光、链霉亲和素‑酶偶联物，就可以实现脂筏结构可视化，用于荧光显微镜、共聚焦成像，观察脂筏在细胞膜上分布形态，研究脂筏参与的细胞信号事件。在神经生物学方向，CTB‑GM1 复合物可以经由胞吞进入神经元，沿轴突逆行转运，Biotin‑XX‑CTB 可作为神经逆行示踪工具，标记神经组织切片，结合链霉亲和素检测体系，解析神经元投射通路网络，长 XX 连接臂保障组织切片环境下依旧维持高效生物素结合能力。

该试剂也可用于流式细胞分析，识别细胞膜表面 GM1 表达水平，区分不同细胞群体；也可用于固相富集，将 Biotin‑XX‑CTB 结合细胞裂解液，捕获含有 GM1 糖脂的膜复合物，研究脂筏相关蛋白组分。实验中需要设置对照，排除游离生物素杂质干扰；工作浓度不宜过高，高浓度会带来非特异性结合。作为重组蛋白偶联探针，长间隔臂 XX 是该试剂关键设计点，兼顾蛋白靶向识别与生物素亲和捕获双重能力，广泛用于膜微区、神经回路的体外科研研究。

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