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AF488 Phalloidin,AF488标记鬼笔环肽,英文别名Alexa Fluor488‑Phalloidin、AF‑488 Phallotoxin、Alexa Fluor 488 Phalloidin conjugate,是真菌来源鬼笔环肽多肽分子与Alexa Fluor488绿色荧光染料共价偶联而成的探针,专门靶向结合丝状肌动蛋白(F‑actin),不与单体球状肌动蛋白(G‑actin)发生结合,是细胞骨架研究领域经典工具试剂。鬼笔环肽多肽骨架可以特异性嵌入F‑肌动蛋白亚基之间的裂隙,稳定肌动蛋白丝结构,偶联的AF488荧光团激发495 nm、发射519 nm,亮度高,光稳定性优于FITC标记鬼笔环肽,适配共聚焦显微镜、超高分辨荧光显微镜,可清晰呈现应力纤维、丝状伪足、板状伪足、胞质收缩环等精细骨架结构。
该试剂储存条件‑20℃避光,原液多溶解于DMSO,使用时稀释到含BSA的PBS缓冲液配置工作液,多肽结构对甲醇敏感,样本固定严禁使用含有甲醇的固定剂,甲醇会破坏F‑肌动蛋白高级结构,直接造成染色失效,优先选用无甲醇多聚甲醛完成样本固定,固定结束后适度透化,帮助探针渗透进入细胞内部,室温避光孵育20‑90分钟即可完成染色,孵育结束后PBS充分洗涤去除游离探针,搭配DAPI进行细胞核复染,实现骨架与细胞核共定位成像。该探针仅适用于经过固定透化的细胞、组织切片样本,无法直接用于活细胞染色,鬼笔环肽本身难以穿透完整活细胞膜,同时结合后会稳定肌动蛋白丝,抑制肌动蛋白动态周转,干扰活细胞生理活动。
该探针广泛应用于细胞迁移、细胞分裂、细胞形态重塑相关机制探究。在细胞分裂样本中,可以清晰观察胞质分裂环的组装与解离;迁移细胞样本中观测伪足内部肌动蛋白纤维排布;上皮组织切片中观察细胞皮层肌动蛋白网络形态。同时可与红色、远红波段荧光标记抗体联用,开展细胞骨架与胞内细胞器、信号蛋白多色共定位,解析蛋白在肌动蛋白骨架上的定位分布。该探针也用于微生物、藻类细胞骨架观测,经过样本固定条件优化后,可以解析低等真核生物肌动蛋白网络排布模式。在定量层面,借助荧光强度,还可以对细胞内F‑肌动蛋白相对含量进行半定量统计,对比不同处理条件下细胞骨架聚合水平的变化。操作环节需要注意探针孵育时间不宜过短,否则骨架染色信号偏弱,同时避免强光照射样本,封片时选用抗淬灭封片剂,延长成像采集窗口。AF488标记鬼笔环肽凭借高特异性结合能力,成为细胞骨架荧光成像不可或缺的标记试剂。

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