AF488 Hy，CAS号2500973‑94‑2，英文别名AF488‑Hydrazide、Alexa Fluor488 Hydrazide、Alexa Fluor488 Hy，中文名称AF488酰肼，是带有酰肼活性官能团的Alexa Fluor488衍生物，专门针对醛基、酮羰基实现特异性荧光标记，和NHS酯类氨基染料形成位点互补，拓展生物分子标记的可选位点范围。该试剂分子量570.49，激发波长495 nm，发射波长518‑519 nm，为橙红色固体粉末，分子带有磺酸基团，水溶性良好，可溶于DMSO、DMF，‑20℃避光干燥储存，HPLC纯度大于95%，反应生成腙键产物在中性、弱酸性条件下化学性质稳定，适合后续荧光成像分析。酰肼基团（‑NHNH₂）不会和蛋白分子上大量存在的伯氨基发生反应，只特异性识别醛、酮羰基，在弱醋酸钠缓冲液pH5.0‑5.5条件下反应效率*高，高pH环境会削弱标记反应效率，这一点和NHS酯标记体系存在明显区别。

天然糖蛋白、糖脂分子本身不存在游离醛基，需要借助高碘酸钠氧化糖链邻二醇结构，断裂碳碳键生成醛基，之后才可以和AF488酰肼发生共价偶联，实现糖蛋白、糖链的荧光标记。该特性使其成为糖生物学研究重要工具，用于糖蛋白探针制备、细胞表面糖基化状态表征。醛固定处理的组织样本，部分生物大分子被氧化生成羰基，也可以使用AF488酰肼对固定样本内羰基位点进行荧光染色，观察固定过程产生的羰基分布情况。在蛋白化学修饰研究中，天冬氨酸、谷氨酸残基的羧基，在EDC碳二亚胺缩合剂介导下，也可以和酰肼基团发生偶联，实现羧基位点的荧光修饰，拓展标记位点选择。

该试剂不能直接标记未经过氧化处理的天然完整蛋白，这是实验中最容易出现的误区，若样本没有醛酮位点，几乎不会产生共价标记，只会出现非特异性吸附背景。标记完成之后需要充分透析或者凝胶过滤去除未反应游离探针，避免游离染料造成背景干扰。标记后的糖蛋白偶联物，可用于凝胶荧光电泳检测、细胞结合实验，观察糖蛋白与细胞表面受体相互作用。在细胞样本层面，氧化处理细胞表面糖链之后，使用AF488酰肼标记，实现细胞膜糖链荧光可视化，观测细胞表面糖基分布模式。该探针与氨基活性染料形成很好互补，当蛋白分子表面赖氨酸位点被全部占用，无法使用NHS酯染料标记时，可以通过氧化引入醛基，选用AF488酰肼完成荧光修饰。该探针为糖组学、蛋白化学修饰方向提供差异化标记手段，填补普通氨基染料无法覆盖的标记场景。

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