PLGA抗原纳米颗粒细胞摄取量怎么准确测定？西安瑞禧生物提供荧光标记PLGA抗原纳米颗粒及对照样品定制

一、PLGA抗原纳米颗粒细胞摄取量怎么准确测定？

PLGA抗原纳米颗粒的细胞摄取量，可采用荧光标记、细胞裂解、抗原释放及标准曲线校正相结合的方法进行准确测定。FITC标记抗原在细胞内体、PLGA颗粒表面及不同溶剂中的荧光强度可能存在差异，直接利用流式细胞术平均荧光强度（MFI）计算摄取量，容易产生定量误差。

对于FITC标记抗原，可使用10% SDS裂解细胞，通过DMSO处理PLGA纳米颗粒，使抗原进入已知检测环境，再利用相同介质配制的标准曲线计算实际抗原含量。检测时可采用490 nm激发、525 nm发射，并将结果换算为单个细胞摄取的抗原质量（pg/细胞）。

同时应设置游离荧光抗原、空白PLGA纳米颗粒及未标记抗原颗粒等对照，结合充分洗涤、细胞表面荧光淬灭及共聚焦成像，排除游离染料和细胞膜表面吸附造成的干扰。

二、西安瑞禧生物提供哪些PLGA抗原纳米颗粒及对照样品定制？

西安瑞禧生物可围绕PLGA、PLGA-PEG、羧基功能化PLGA及FITC、Cy5荧光标记抗原开展科研材料与纳米颗粒定制。

针对抗原递送与细胞摄取实验，可根据PLGA分子量、乳酸与羟基乙酸比例、抗原分子量和目标粒径，设计抗原偶联PLGA纳米颗粒，并配套制备空白颗粒、游离标记抗原和未标记抗原颗粒等对照样品。

相关材料可结合粒径、PDI、Zeta电位、抗原偶联量、荧光标记度及游离染料残留进行质量评价，为不同实验组的摄取定量提供可比较的材料条件。

三、真实论文如何验证PLGA抗原摄取量测定方法？

2024年发表于Vaccines的研究《Uptake Quantification of Antigen Carried by Nanoparticles and Its Impact on Carrier Adjuvanticity Evaluation》，采用PLGA纳米颗粒偶联金黄色葡萄球菌EsxB抗原，并通过FITC荧光标记研究树突状细胞摄取及纳米载体佐剂作用。

论文第2.5节明确记载，实验使用100 mg西安瑞禧生物提供的PLGA，通过乳化-溶剂挥发法制备纳米颗粒，再将FITC-EsxB抗原连接至颗粒表面。

研究发现，FITC-EsxB在PBS、10% SDS及PBS/DMSO混合介质中的荧光表现不同。抗原位于细胞内或PLGA颗粒表面时，其荧光强度受到局部环境影响，无法直接利用单一标准曲线准确换算抗原含量。

研究采用10% SDS裂解树突状细胞，并使用PBS/DMSO（1:2，v/v）处理抗原修饰的PLGA颗粒，使标记抗原进入已知检测环境。通过介质匹配的标准曲线进行定量后，结果与BCA蛋白定量接近，验证了该方法的可靠性。

四、如何区分抗原摄取增加与PLGA载体佐剂作用？

准确测得抗原摄取量后，还需要将细胞免疫反应与实际摄取的抗原质量进行关联。

上述研究发现，在相同抗原摄取量条件下，PLGA纳米颗粒递送组诱导的IL-2分泌约为游离抗原组的3.6倍，IL-12分泌约为游离抗原组的1.5倍。

这一结果说明，PLGA纳米颗粒能够增强抗原递送体系的免疫应答，且这种增强作用不能完全由摄取量增加解释，还涉及载体本身的佐剂效应。

西安瑞禧生物可根据抗原类型、PLGA结构、荧光检测通道及细胞实验要求，提供相关纳米载体和对照样品定制支持。实验评价可结合抗原摄取质量、流式细胞术、共聚焦成像及IL-2、IL-12、MHC II、CD86等免疫指标，综合分析抗原递送与载体功能。

五、参考文献

Uptake Quantification of Antigen Carried by Nanoparticles and Its Impact on Carrier Adjuvanticity Evaluation. Vaccines. 2024;12(1):28.

DOI：10.3390/vaccines12010028

论文链接：https://www.mdpi.com/2076-393X/12/1/28

PMC全文：https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC10818693/