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ADC的成功设计是在循环中高药物连接物的稳定性与有效的**内细胞毒性药物释放的结合。过去几年中,在开发更稳定的连接方面取得了重大成就。但是,循环中从载体抗体中非特异性释放药物仍然是决定ADC半衰期的关键因素。为了测量已从载体抗体释放的药物部分(即游离药物),可以将竞争性LBA包被用于捕获的抗药抗体和恒定浓度的HRP-药物一起用作报告基因。

因为从ADC释放的游离药物的清除速度比ADC自身的清除速度快得多,所以可能无法检测到游离药物。为了解决这个问题,可以测量与ADC结合的剩余药物。通过使用组织蛋白酶B消化释放先前与载体抗体结合的药物,然后通过竞争性LBA分析或LC-MS定量游离药物来实现此测量。
理想情况下,应在ADC开发和表征的早期阶段开发用于非临床PK生物学分析的测定方法。与平均DAR标准相比,可以通过测定富集或纯化的药物抗体比率(DAR)分数的回收率来进行分析评估,以确保不同的分析形式均等地回收药物。如果无法进行此分析,则对于生物分析方法的设计,ADC的作用机理,靶向的**抗原,接头的类型,药物抗体比率,细胞毒性药物等的详细信息是必需的。除了LBA方法外,亲水相互作用色谱(HILIC),HPLC和LC-MS还用于定量ADC。
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