据报道肝癌是全世界最常见的**之一，常见的治疗方法很难完全治愈。有研究证明有效的递送系统在siRNA在抗**研究中的应用中发挥着重要作用。这里科研团队尝试设计了一种基于改性聚乙烯亚胺 (PSH)和DSPE-PEG-cRGD的新型siRNA递送系统 cRGD-PSH-NP解决上述问题。

文献简述

有研究发现RNA干扰（RNAi）技术为肝癌提供了新的治疗机会，RNAi可以使细胞内mRNA发生特异性降解，由于survivin在肝细胞癌中高表达，因此survivin是RNAi治疗肝癌的潜在靶点。

作为一种核酸药物，siRNA清除速度快，治疗效率有限，据此需要一种高效的递送系统保护 siRNA并能够将其释放到癌细胞质中。

siRNA的可控释放是递送系统设计中的一个难点，基于生物相容性考虑，使用了多种纳米载体，例如脂质体、纳米胶囊和阳离子纳米粒子等。与正常细胞相比，**细胞中还原物质浓度更高，引起siRNA释放的氧化还原响应纳米颗粒被广泛应用。

为了进一步改善siRNA在**细胞中的积累，它们通常与各种纳米颗粒相连。据报道，一种靶向肽，环状精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（cRGD）修饰的纳米颗粒，通过靶向αvβ3整合素来增强**积累。

在之前的研究中，合成了一种还原敏感的阳离子聚合物（PEI-SS-HA，PSH），并设计了含有PSH的纳米颗粒，它表现出合适的特性和高转染效率。

科研学者将鸡蛋磷脂酰胆碱 (ePC)、胆固醇、DSPE-PEG 纳入支持的双层中。将阳离子 PSH 掺入到纳米颗粒中，将 siRNA 快速释放到细胞核中。为了增加循环时间并精确靶向肝癌细胞，使用DSPE-PEG 2000 -cRGD构成最外层结构作为纳米颗粒的靶向配体。

制备方法：

采用乙醇稀释法制备脂质纳米粒(NP)或含有survivin siRNA的脂质纳米粒(NP/S)。对于含有PSH (PSH-NP)、ePC、胆固醇、PSH 和 DSPE-PEG的NP2000将其溶解在乙醇中，混合均匀，得到脂质溶液，PSH/总脂质的摩尔比为10%~50%。然后将脂质溶液以1:9的体积比快速混合注入PBS溶液（pH 6.8）中，得到不同浓度PSH的PSH-NP。

对于含有PSH-NP的 siRNA (PSH-NP/S)，将生存素 siRNA 溶解在预冷的 DEPC 水中并添加到 PSH-NP 溶液中，然后以 12:1 的各种 PSH/siRNA 摩尔比混合 60 秒到 2:1。同时，制备PEI-NP/S作为对照组，证实了改性PEI（PSH）的低毒性和高细胞摄取效率，并证明了在纳米颗粒中添加PSH代替PEI的必要性。

在制备过程中，PSH被PEI-NP/S组中的PEI（25 kDa）取代，其他工艺与PSH-NP/S的制备方法一致。对于含有 cRGD (cRGD-NP)、ePC、胆固醇、PEI、DSPE-PEG 的 NP2000和 DSPE-PEG 2000 -cRGD 溶解在乙醇中，在快速混合下注入 PBS 溶液 (pH 6.8)。

然后将 Survivin siRNA 溶解在预冷的 DEPC 水中并加入到 cRGD-NP 中，然后混合 60 秒以获得 cRGD-NP/S。cRGD-NP/S 用于比较以显示 PSH 是否可以提高纳米颗粒的转染效率。最后，设计并制备了代表含有cRGD和PSH的NP的cRGD-PSH-NP。

结论

综上科研团队成功设计了基于PEI (PSH) 的阳离子聚合物和靶向配体 (DSPE-PEG 2000 -cRGD) 的纳米粒子cRGD-PSH-NP，可有效递送存活素 siRNA。该纳米粒子毒性低并且能够有效地结合siRNA。体外和体内实验表明，cRGD-PSH-NP/S是安全的，具有很高的抗**活性，适合作为抗肝癌核酸药物的递送。

材料

DSPE-PEG 磷脂-聚乙二醇

http://www.xarxbio.com/pro/pro-3524.html

DSPE-PEG-cRGD 磷脂-聚乙二醇-多肽

http://www.xarxbio.com/pro/pro-2495.html

DSPE-PEG-Cholesterol  磷脂-聚乙二醇-胆固醇

http://www.xarxbio.com/pro/pro-875.html

Cy3标记survivin siRNA 

http://www.xarxbio.com/pro/pro-38987.html

含有survivin siRNA的脂质纳米粒子

http://www.xarxbio.com/pro/pro-38988.html

cRGD-NP 多肽修饰脂质纳米颗粒

http://www.xarxbio.com/pro/pro-38989.html

PSH-NP 聚乙烯亚胺修饰脂质纳米颗粒

http://www.xarxbio.com/pro/pro-38990.html

阳离子聚合物

http://www.xarxbio.com/pro/pro-38991.html

靶向肽修饰纳米粒子

http://www.xarxbio.com/pro/pro-38992.html

HRP偶联山羊抗兔IgG

http://www.xarxbio.com/pro/pro-37538.html

HRP偶联山羊抗小鼠IgG

http://www.xarxbio.com/pro/pro-37539.html

Cholesterol 胆固醇  

http://www.xarxbio.com/pro/pro-13767.html

本文涉及的合成技术

磷脂-PEG偶联技术

http://www.xarxbio.com/pro/progc-392-382.html

多肽定制技术

http://www.xarxbio.com/pro/progc-540-513.html

载药脂质体定制及其他脂质体定制技术

http://www.xarxbio.com/pro/progc-532-517.html

阳离子脂质体定制技术

http://www.xarxbio.com/pro/pro-38993.html

原文献链接：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC8168781/

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