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GPI锚定蛋白(GPI-anchored protein, GPI-AP)是一类通过其羧基末端的糖基化磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidy-1-inositol ,GPI)结构锚定于真核细胞膜表面的蛋白。
下面瑞禧生物小编和大家一起来了解一下 GPI锚定蛋白的细胞膜表面修饰的内容。
随着对GPI锚定蛋白研究的不断深入,人们开始利用GPI/格传统的跨膜型表面蛋白罐定于细胞表面以发挥其功能,逐步建立了GPI锚定蛋白转移法细胞表面左程技木的。该技术主要包括以下几个方面:①构建感兴趣蛋白与GPI信号肽的融合分子:②GPI锚定蛋白的表达和纯化;③GPI锚定蛋白的转移和细胞表面修饰。根据对蛋白质侧向活动性的不同要求,人们所嵌合的GPE信号肽所附带的氨基酸序列的长度也不一致。
目前,人们所采用的AF、坚LA.P(Placextal alkalire. pbosphataser ,胎盘碱性磷酸酶)等天然锚定蛋白质的羧基端GF核信号肽,都有不同的长度[g。嵌合性cDNA构建到合适的真核表达载体后,转染真核细胞,如 CHO 细胞系等,可筛选到高表达的细胞株。有研究报道,如果载体中含有GS或DHFR基因,就可以用MSX或 MTX进行加压筛选,更容易获得高表达的细胞株。有研究报道,用GS真核表达系统,从10:细胞中,可得到 100ug 的GPI 锚定蛋白。
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