CY3-Fibronectin-Bovine，花菁染料CY3标记牛纤维连接蛋白
Cy3-Fibronectin-Bovine是将红橙色花菁染料Cy3共价偶联至牛源纤维连接蛋白（Fibronectin, FN）形成的荧光标记蛋白，用于细胞外基质研究、细胞粘附及迁移实验中。Fibronectin是一种高分子量（约440 kDa）糖蛋白，由二聚体构成，每个亚基含有多种功能域，包括整合素结合位点和肝素结合区，富含赖氨酸残基，为Cy3-NHS酯偶联提供理想位点。标记后，可通过荧光成像追踪Fibronectin在细胞外基质中的分布及与细胞膜受体的相互作用。
合成过程研究
蛋白溶液与缓冲体系优化
FN通常溶解于PBS（pH 7.4）或碳酸缓冲液（pH 8.0），浓度控制在0.5–2 mg/mL。为了避免巯基或还原剂影响NHS酯偶联，溶液中通常不含DTT或β-巯基乙醇。温和条件保持Fibronectin结构稳定，防止解聚或变性。
染料活化及溶解
Cy3-NHS酯在干燥的DMSO中溶解，避免水解失活。染料与蛋白摩尔比根据标记强度需求控制，一般为5–15倍，以确保有效标记而不引起蛋白功能受损。
偶联反应机制研究
偶联依赖于Fibronectin赖氨酸残基氨基的亲核进攻NHS酯碳原子，释放NHS基团，形成稳定酰胺键。研究表明，该反应温和、特异性高，pH 7.5–8.0条件下效率佳。通过调节pH、温度及反应时间，可控制染料分布密度及蛋白活性保持率。
去除游离染料与纯化
偶联反应后，混合物中存在未反应Cy3染料，需要通过透析、超滤或凝胶过滤（如Sephadex G-100）去除，以获得高纯度标记产物。纯化过程中监测A550吸光度，可判断Cy3结合量；同时SDS-PAGE结合荧光扫描确认蛋白完整性及标记均一性。
偶联效率与功能评估
研究显示，Cy3-Fibronectin偶联后仍保持整合素结合能力，可支持细胞粘附实验。荧光强度与标记摩尔比呈正相关，但过高的标记密度可能影响蛋白折叠和生物功能，因此需优化染料用量。
稳定性与储存条件
纯化后的Cy3-Fibronectin在PBS缓冲液中稳定，避光低温储存可保持荧光及蛋白活性数周至数月。可加入甘油或BSA增强稳定性，适用于细胞外基质成像、细胞行为研究及生物材料功能化研究。
总结
Cy3-Fibronectin-Bovine的制备依赖于Cy3-NHS酯与Fibronectin赖氨酸残基氨基的酰胺键形成，反应温和、特异性高。通过溶液优化、摩尔比控制、纯化及功能评估，实现高纯度、稳定的荧光标记蛋白。该标记蛋白保留Fibronectin生物活性，适用于细胞粘附、迁移实验及细胞外基质可视化研究，为细胞生物学及生物材料研究提供可靠工具。
产品名称：CY3-Fibronectin-Bovine，花菁染料CY3标记牛纤维连接蛋白
纯度：95%+
规格：mg/g
用途：科研

状态：固体/粉末/溶液

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仅用于科研，不能用于人体。小编axc