Maleimide‑Biotin（生物素‑马来酰亚胺）是把生物素（Biotin）亲和结构单元与马来酰亚胺反应基团结合得到的双功能标记砌块，分子同时拥有亲和识别位点与巯基反应活性位点，是亲和捕获、分子标记体系中常用的交联修饰试剂。生物素部分可以和链霉亲和素、亲和素发生高特异性、高结合力的非共价相互作用；马来酰亚胺片段负责靶向底物分子上的巯基位点，完成共价连接，两大功能模块协同，实现底物分子的生物素化标记。

该分子的反应特性集中体现在巯基的选择性偶联。pH处于6.5‑7.5中性缓冲体系内，马来酰亚胺优先和巯基发生迈克尔加成，生成稳定硫醚键，此条件下和氨基的副反应占比很低，可以很大程度规避非特异性修饰。对比NHS‑Biotin这类氨基靶向生物素化试剂，Maleimide‑Biotin（生物素‑马来酰亚胺）适合底物氨基位点过多、需要避开氨基，只修饰巯基的实验场景。对于天然蛋白半胱氨酸残基、人工引入巯基的多肽、巯基改性高分子材料，都可以完成定点生物素标记。

在合成工艺上，Maleimide‑Biotin（生物素‑马来酰亚胺）一般通过酰胺缩合反应制备。生物素分子的羧基经过活化，与带有马来酰亚胺的氨基中间体发生缩合，构建酰胺键得到终产物。合成中需要控制温度，高温会加速马来酰亚胺水解；同时要隔绝强亲核杂质，防止马来酰亚胺提前失活。产物经重结晶或者反相色谱纯化，得到类白色固体粉末。分子水溶性偏弱，进行水相标记实验时，常需要少量助有机溶剂辅助溶解。

该试剂广泛用于分子捕获、固相富集、材料表面改性方向。将该试剂与巯基化底物反应，给底物带上生物素标签，后续借助固定化链霉亲和素固相载体，就可以把被标记的底物从混合体系中分离富集。在高分子材料改性方面，巯基修饰的微球、凝胶表面，通过该试剂接枝生物素，赋予材料亲和识别能力，搭建亲和固相基质。实验操作时，需要提前去除体系内游离巯基杂质，不然游离巯基会消耗试剂，降低标记效率。

储存上固体试剂密封避光‑20℃干燥保存，防潮。水溶液现配现用，不建议长时间放置；避免接触强碱环境，碱性环境会造成马来酰亚胺水解开环，丧失巯基反应活性。

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