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荧光标记外泌体的步骤解析(含相关外泌体)

时间:2021-01-29 10:41:00       浏览:148

西安瑞禧生物定制供应荧光标记外泌体、天然活性分子、胆酸、氨基酸、蛋白、配体、多肽、药物、共聚物、衍生物、抗体、细胞、酶、凝集素、纳米、糖类及适配体等。

 

外泌体(Exosome)是指包含了复杂 RNA和蛋白质的膜性膜泡 (30-150nm),其直径在30-150nm左右。外泌体的形成过程:细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中而形成外泌体。

外泌体天然存在于体液中,包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中,所有培养的细胞类型也均可分泌外泌体。

 

制备荧光标记外泌体的步骤如下

1.取200 ug/ml的C5-马来酰亚-Alexa488(绿色荧光)或C5-马来酰亚-Alexa633(红色荧光)2.5 ul,加入提取好的含60- 100 ug蛋白质的30ul外泌体样品中,以PBS补足至50ul ,不搅拌的情况下于暗室中室温孵育60分钟。

⒉.在孵育时将exosome spin columns ( Invitrogen )试剂盒按照说明书准备好并将粉末树脂于室温下水合15-30分钟。

3.将装有柱子的收集管于离心机水平转子中以750x g离心2分钟,弃收集管,向树脂中加入荧光染料孵育后的外泌体

4.将柱子置于1.5ml微量离心管750x g离心3分钟,多余的染料会被树脂吸附

5.荧光标记后的外泌体缓慢加入1000ul不含酚红的DMEM,于0.22um过滤膜过滤后。分装并储存于负80度备用。

 

 

同时外泌体可与相邻细胞和远端组织细胞相互作用,并且涉及许多疾病的发生发展,包括肿瘤等,外泌体还被认为潜在的生物治疗药物的递送载体,但其具体的作用方式与机制目前仍并不十分明确。因此用荧光探针在不影响外泌体大小和功能的情况下,直接或间接标记细胞外囊泡,可在研究中在不影响功能的情况下实现可视化,帮助相关研究的进行。

 

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